[发明专利]一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统、方法及应用有效
| 申请号： | 201910645552.0 | 申请日： | 2019-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN110468155B | 公开（公告）日： | 2021-05-14 |
| 发明（设计）人： | 黄耀伟;杨永乐;王斌 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N7/00;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 拯救 肠道 冠状病毒 系统 方法 应用 | ||
1.一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统，其特征在于，包括：
包含猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA的重组转录载体；
包含SeACoV-N基因的辅助质粒，
其中，所述猪肠道甲型冠状病毒为单股正链RNA病毒，所述猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA是指猪肠道甲型冠状病毒正链RNA序列对应的DNA序列，所述SeACoV-N基因的序列为猪肠道甲型冠状病毒编码该基因的RNA序列对应的DNA序列，SeACoV-N基因的序列如SEQ IDNO.1所示。
2.如权利要求1所述的系统，其特征在于，所述重组转录载体使用质粒为pSB，所述辅助质粒使用的质粒为pRK5。
3.如权利要求1所述的系统，其特征在于，所述猪肠道甲型冠状病毒全基因组DNA的第24222-24224位碱基由AGT突变为TCT。
4.一种拯救猪肠道甲型冠状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将权利要求1～3任一所述系统中的重组转录载体和辅助质粒共转染入宿主细胞中；
(2)培养后收集细胞与上清中的拯救所得猪肠道甲型冠状病毒。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中重组转录载体和辅助质粒加入的质量比为2∶1。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为BHK-21细胞。
7.使用拯救猪肠道甲型冠状病毒的方法拯救获得的猪肠道甲型冠状病毒，其中方法包括以下步骤：
(1)将权利要求3所述系统中的重组转录载体和辅助质粒共转染入宿主细胞中；
(2)培养后收集细胞与上清中的拯救所得猪肠道甲型冠状病毒。
8.如权利要求7所述拯救获得的猪肠道甲型冠状病毒在作为猪肠道甲型冠状病毒研究模型中的应用。
9.如权利要求7所述拯救获得的猪肠道甲型冠状病毒在制备预防猪腹泻疫苗中的应用。
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