[发明专利]一种神经节苷脂粗提物分离制备方法

说明书

本发明提供了一种神经节苷脂粗提物分离制备方法，包括以下步骤：取神经节苷脂粗提物于试管中，按90/10~10/90比例加入有机溶剂和水超声溶解，溶解浓度为0.1~100 mg/mL，过0.45μm有机膜，得样品；取所述样品采用液相色谱柱上样洗脱，采用硅胶表面极性基团键合相填料，柱温为5~85^。C，流速为0.05~1 BV/min，色谱柱内径为2.1~1000 mm，流动相采用水和有机溶剂的混合液，混合比例为95/5~5/95；收集洗脱后的样品进行旋蒸蒸发浓缩处理。本发明方法分离度高，周期短，操作便捷，载样量大，易于实现工业化生产。

技术领域

本发明属于生物医药分离提取领域，具体涉及一种神经节苷脂粗提物分离制备方法。

背景技术

神经节苷脂(gangliosides，GLS)是一组含有唾液酸的鞘糖脂，分子由疏水的神经酰胺和亲水的含唾液酸的寡糖链组成，广泛分布于脊椎动物各组织的细胞膜上，其中以神经系统含量最为丰富。

神经节苷脂的功能包括以下几种：1、促进神经细胞及大脑组织的正常发育，防治脑瘫等疾病；2、修复损伤神经及大脑组织，防治脑中风；3、增强记忆功能；4、延缓神经细胞的衰老，防治帕金森、老年痴呆等疾病，其作用备受医药领域关注。

目前，对神经节苷脂粗提物分离制备方法主要有：1、离子交换色谱法，该方法主要依赖神经节苷脂中唾液酸的个数不同，导致所带电荷不同，填料对其吸附不同的方式进行分离，但是流动相有盐离子的存在，后续脱盐步骤复杂，导致样品损失严重；2、大孔吸附树脂分离法，有机化合物根据吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的溶剂洗脱而达到分离的目的，但该方法有机残留物高，预处理难度大，强度差，使用寿命短，分离效果差等缺点，很难作为一种稳定且简便的分离制备方法。

发明内容

有鉴于此，本发明期望提供一种神经节苷脂粗提物分级分离制备方法，神经节苷脂粗提物经有机溶剂溶解，过膜，通过亲水色谱柱分离，得分离后的神经节苷脂，该方法分离度高，周期短，操作便捷，载样量大，易于实现工业化生产。

为达到上述目的，本发明采用一种神经节苷脂粗提物分级分离制备方法，包括以下步骤：

a)取神经节苷脂粗提物于试管中，按90/10～10/90比例加入有机溶剂和水超声溶解，溶解浓度为0.1～100mg/mL，过0.45μm有机膜，得样品；

b)取所述样品采用液相色谱柱上样洗脱，采用硅胶表面极性基团键合相填料，柱温为5～85℃，流速为0.05～1BV/min，色谱柱内径为2.1～1000mm，流动相采用水和有机溶剂的混合液，混合比例为95/5～5/95；

c)收集洗脱后的样品进行旋蒸蒸发浓缩处理。

进一步地，所述步骤a)和步骤b)中的有机溶剂为异丙醇、甲醇、乙醇、乙腈、正丁醇、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氢呋喃中的一种或多种；

进一步地，所述步骤b)中的硅胶表面极性基团键合相填料中极性基团包括：羟基，羧基，酰氨基，氰基等中的一种或多种；

进一步地，所述步骤b)中的硅胶表面极性基团键合相填料中硅胶粒径为3～100μm，孔径为60～300A，比表面积为100～500m²/g。

进一步地，所述步骤c)中的旋蒸蒸发温度为40℃，转速为70r/min。

本发明有益效果如下：本发明分离度高，周期短，操作便捷，载样量大，易于实现工业化生产。

附图说明

图1为本发明一种神经节苷脂粗提物分级分离制备方法流程示意图；

图2为本发明实施例1制备谱图；

图3为本发明实施例2制备谱图。