[发明专利]基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，包括PCR反应体系、SAP反应体系和iPLEX延伸体系，

所述PCR反应体系包括：根据GLCCI1基因rs37969位点设计的引物对、PCR Buffer、MgCl₂、Taq酶、dNTP；

所述SAP反应体系包括虾碱性磷酸酶、SAP Buffer和去离子水；

所述iPLEX延伸体系包括iPLEX Buffer、iPLEX Enzyme、iPLEX Termination mix、Primer Mix和去离子水。

2.根据权利要求1所述基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述PCR反应体系中所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的DNA序列如SEQ ID NO.1所示；所述下游引物的DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述PCR反应体系包括1.625mM的MgCl₂、500μM的dNTP、100μM的引物对、0.5U/rxn的Taq酶、1.25x PCR Buffer和去离子水。

4.根据权利要求1所述基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述SAP反应体系包括1U/μl的虾碱性磷酸酶、10x SAP Buffer和去离子水。

5.根据权利要求1所述基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂，其特征在于，所述iPLEX延伸体系包括0.222x iPLEX Buffer、1x iPLEX Termination mix、1xiPLEX Enzyme、Primer Mix。

6.一种用于儿童哮喘病检测的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1至5中任一项所述的试剂。

7.一种权利要求1至5中任一项所述的基于GLCCI1基因rs37969位点用于儿童哮喘病检测的试剂在制备用于预测儿童患哮喘病风险的试剂盒中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将待测物DNA，通过所述PCR反应体系进行PCR扩增得到PCR产物；

S2、将所述PCR产物置于所述SAP反应体系中进行SAP反应得到SAP处理液；

S3、将所述SAP处理液加入所述iPLEX延伸体系中进行延伸反应得到iPLEX处理液；

S4、将所述iPLEX处理液纯化后进行基因测序，若GLCCI1基因rs37969位点基因型为GG则6岁前发生哮喘的风险较小；若基因型为TT则为哮喘病的易感人群并且6岁前发生哮喘风险增加，采用ICS治疗后，MMEF或PD20改善较小，若基因型为GT则6岁前发生哮喘风险增加，采用ICS治疗后，MMEF或PD20改善较小。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述S1中所述PCR扩增具体为：94℃预变性5min、94℃变性20sec、56℃退火30sec、72℃延伸1min；循环变性、退火、延伸步骤45次；在72℃最后延伸3min，4℃取出。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述S2中所述SAP反应具体为：37℃反应20min、85℃反应5min、4℃取出；

和/或，所述PCR产物与所述SAP反应体系的体积比为5︰2。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述S3中所述延伸反应具体为：

S3-1、94℃预变性30sec；

S3-2、94℃变性5sec、52℃退火5sec、80℃延伸5sec、

S3-3、循环所述S3-2中退火和延伸步骤5次；

S3-4、循环S3-2、S3-3步骤40次；

S3-5、在72℃下最后延伸3min，4℃取出；

和/或，所述S3中，所述SAP处理液与所述iPLEX延伸体系的体积比为7︰2。