[发明专利]乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法

说明书

本发明公开了乙酰半胱氨酸溶液中N，N‑二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法，包括，分别采用流动相稀释待测乙酰半胱氨酸溶液和溶解N，N‑二乙酰基羊毛硫氨酸对照品，制得供试品溶液和对照品溶液，随后分别进行高效液相色谱检测，根据检测结果计算得到其含量，色谱条件为，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱，检测波长：205±2nm，流动相：体积比为97.4％：2.6％‑98.6％：1.4％的6.8g/L磷酸盐缓冲液‑甲醇溶液。本发明可有效检测乙酰半胱氨酸溶液中N，N‑二乙酰基羊毛硫氨酸，且无干扰，专属性强；其检测限和定量限分别为8ng和32ng，可实现定量检测；检测准确度较好；应用前景广阔。

技术领域

本发明属于分析测试技术领域，涉及乙酰半胱氨酸中杂质的检测方法，具体涉及乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法。

背景技术

乙酰半胱氨酸(Acetylcysteine)从上世纪60年代开始作为祛痰药广泛应用于临床，是临床上作用机制最全面的祛痰药物。由于乙酰半胱氨酸含有巯基(-SH)，可使多肽链中的双硫键(-S-S-)断裂，降低痰的粘度，从而使痰容易排出，并能通过刺激气道上皮纤毛运动，增强痰液清除。

目前，乙酰半胱氨酸在国内有颗粒剂、片剂、注射液、滴眼液和吸入溶液等剂型。由于吸入用乙酰半胱氨酸溶液与口服制剂和注射剂相比能更加直接到达上呼吸道及肺部，具有起效迅速和全身不良反应少等优势，尤其适用于儿童患者。

吸入用乙酰半胱氨酸溶液仅收载于美国药典USP40，但是该法定标准没有有关物质检测项，其他如英国药典BP2017、欧洲药典EP9.0和中国药典CP2015均未收载该品种。

关于乙酰半胱氨酸溶液有关物质检测的现有技术较少。申请号为201010297844.9的中国发明专利公开了一种分离测定乙酰半胱氨酸对映异构体的方法，即分离测定杂质对映异构体N-乙酰基-D-半胱氨酸，该专利申请采用柱前衍生化方法，衍生化试剂为Nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物，如Nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-丙胺酰胺，所用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为乙酸铵溶液-乙腈体系，且梯度洗脱，以实现对乙酰半胱氨酸原料或制剂中的对映异构体杂质N-乙酰基-D-半胱氨酸进行控制；申请号为201811516127.3的中国发明专利公开了一种乙酰半胱氨酸对映异构体的分离检测方法，该方法同样是采用柱前衍生化方法(衍生化试剂为异氰酸酯类)，再使用正相高效液相色谱法进行分离和检测N-乙酰基-D-半胱氨酸。

有关吸入用乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸含量测定的方法在国内外还未见报道。吸入用乙酰半胱氨酸溶液仅控制N-乙酰基-D-半胱氨酸的含量是不合理的，需要根据原料药理化性质、所用辅料、制备工艺和剂型等进行针对性的杂质谱研究和控制，以提高吸入用乙酰半胱氨酸溶液质量控制指标和用药安全性。N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸(杂质E)是吸入用乙酰半胱氨酸溶液中的特有杂质，迄今为止，尚未见到有关吸入用乙酰半胱氨酸溶液对N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸进行控制的报道，也没见到有关乙酰半胱氨酸相关制剂对N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸进行控制的报道。

综上，基于吸入用乙酰半胱氨酸溶液的安全性等角度的考虑，研究开发一种专属性强、灵敏度高且准确度高的乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法显得犹为重要。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法。

本发明采用如下技术方案：

一种乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的检测方法，包括，分别采用流动相稀释待测乙酰半胱氨酸溶液和溶解N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸对照品，制得供试品溶液和对照品溶液，随后分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，根据检测结果计算得到乙酰半胱氨酸溶液中N，N-二乙酰基羊毛硫氨酸的含量；

其中，色谱条件如下：