[发明专利]一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法

权利要求书

1.一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备待测RNA样品，所述RNA样品中至少一种碱基由¹⁵N和¹³C标记；

(2)使用固体核磁共振波谱仪对RNA样品进行检测；

(3)收集与分析检测图谱；其中，

步骤(2)中在使用固体核磁共振波谱仪对RNA样品进行检测之前，进行脉冲序列hCHNH的设定：首先将¹H信号全部激发，信号传递到¹³C上，记录¹³C的化学位移；在¹³C演化过程中，对¹H去耦；之后¹³C将信号传给¹H，接收到信号的¹H再将信号传给直接相连的¹⁵N核；压制掉溶剂信号；最后将¹⁵N信号传回直接相连的¹H，记录¹H化学位移。

2.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，¹H-¹³C CP传递设定的接触时间为1ms-10ms。

3.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，采用TPPM脉冲对¹H去耦。

4.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，¹H-¹⁵N CP传递设定的接触时间为100μs-1000μs。

5.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，利用MISSISIPPI脉冲序列压制掉溶剂信号。

6.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测RNA样品的制备方法包括体外转录法、固相合成方法或生物提取法。

7.如权利要求1或6所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(1)中所述待测RNA样品纯度在90％以上。

8.如权利要求1或6所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，待测RNA样品中RNA质量大于1mg。

9.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，步骤(3)中所述检测图谱包括一维¹H-¹⁵N CP谱图，一维¹H-¹³C CP谱图，一维¹H-³¹P CP谱图，二维¹H-¹⁵N hNH谱图，二维¹H-¹³C hCH谱图，二维¹³C-¹⁵N hNC谱图，二维¹H-¹⁵N hCNH谱图，二维¹H-¹⁵N hCN(PAR)NH谱图，二维¹⁵N-¹³C TEDOR谱图，二维¹³C-¹³C DARR谱图。

10.如权利要求1所述的一种基于固体核磁共振技术检测RNA结构的方法，其特征在于，魔角旋转速率为40kHz；所述脉冲序列hCHNH的设定条件为：¹H的π/2脉冲为2.5μs，¹³C的π/2脉冲为3.5μs，¹⁵N的π/2脉冲为4.5μs；循环等待时间为2s；在¹H-¹³C CP传递和¹³C-¹H CP传递过程中，¹³C的连续锁场功率均为60kHz，¹H的锁场功率为100kHz，接触时间为2ms；在¹³C化学位移演化期，采用TPPM脉冲对¹H去耦，去耦功率10kHz；利用MISSISIPPI脉冲序列对溶剂的信号进行压制；¹H-¹⁵N CP传递和¹⁵N-¹H CP传递中，接触时间设为300μs；¹H-¹⁵N CP传递和¹⁵N-¹H CP传递时，¹⁵N的连续锁场功率设为50kHz，¹H的锁场功率为90kHz。