[发明专利]用于制备mPRα单克隆抗体的免疫原

权利要求书

1.一种用免疫原制备mPRα单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)KLH交联多肽制备：合成目的多肽YEARRPIYE PLHTHWPHN，并与钥孔血蓝蛋白(KLH)交联；

2)免疫原制备和免疫小鼠：磷酸缓冲液50μl溶解步骤1)中的KLH交联多肽后与弗氏完全佐剂等比例混合，充分震荡乳化，将该乳化的免疫原在小鼠多点皮下注射，间隔3周后，第二次免疫，剂量途径同第一次免疫，佐剂换成弗氏不完全佐剂，间隔3周后，第三次免疫，用200μl磷酸缓冲液溶解，不加佐剂，腹腔注射，剂量途径同上，7天后尾部采血ELISA检测抗体效价；间隔3周后，重复上述步骤再加强一次免疫，腹腔注射免疫原3天后，取脾融合；

3)制备杂交瘤细胞：提取步骤2)免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合；

4)融合细胞的筛选：在HAT选择培养液中筛选步骤3)杂交瘤细胞；

5)杂交瘤细胞的克隆化和冻存：有限稀释法将抗体阳性的杂交瘤细胞筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞克隆，对培养上清进行ELISA检测，挑选阳性亚克隆并进行标准处理；

6)腹水法制备单克隆抗体：腹腔注射阳性杂交瘤细胞，接种7-10天后抽取腹水；所述免疫原为多肽，其氨基酸序列为YEARRPIYE PLHTHWPHN。

2.如权利要求1所述的免疫原制备mPRα单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤6)制备的单克隆抗体的冻存方法为：将杂交瘤细置于50％小牛血清、40％不完全培养液和10％DMSO的细胞冻存液中，用程序降温法冻存于液氮中。

3.如权利要求1所述的免疫原制备mPRα单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤6)制备的单克隆抗体的纯化鉴定包括如下步骤：

单克隆抗体的鉴定：用ELISA确定抗体与抗原的亲和力，抗体效价大于1∶10000；

单克隆抗体的纯化：抗体进行Protien A/G纯化。