[发明专利]一种新型壳聚糖酶CsnF及其应用

说明书

本发明涉及一种新型壳聚糖酶CsnF及其应用。所述壳聚糖酶CsnF氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供一种在毕赤酵母中重组表达壳聚糖酶CsnF的制备方法，以及重组菌的发酵工艺，发酵液酶活力高达376.6 U/mL，提供一种壳聚糖酶CsnF的纯化方法，纯度95%，回收率高达92.2%。本发明所述壳聚糖酶CsnF稳定性良好，降解主产物为壳二糖和壳三糖，具有良好的工业化应用潜质。

技术领域

本发明涉及一种新型壳聚糖酶CsnF及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

壳寡糖具有广泛的抑菌、抗炎、抗肿瘤作用，被公认为有效的保健功能食品。壳寡糖由N-乙酰-D-氨基葡萄糖（GLcNAc）和D-氨基葡萄糖（GLcN）通过β-l,4-糖苷键连接而成，极易溶于水，在医药、保健品、功能食品等领域比大分子壳聚糖有更大的应用价值，被誉为“生命的第六元素”。

目前，壳寡糖的制备方法主要分为酸解法、物理降解法、生物酶法三种。其中物理降解法（微波法、超声破碎法）只能作为辅助降解；酸解法利用大量的浓酸和浓碱处理，对环境造成极大污染，而且反应过程剧烈，不宜控制产物分布。相比较于酸解法，利用壳聚糖酶生物酶法降解大分子壳聚糖具有反应条件温和、降解产物单一、反应过程容易控制、环境友好等优势，逐渐成为壳寡糖制备过程中的主流方法。但是，目前市场上销售的壳聚糖酶价格昂贵、活力较低，且稳定性较差，严重限制了壳聚糖酶的应用前景。因此，急需发现新的壳聚糖酶并开发其制备和纯化工艺，为壳寡糖的高值化应用奠定基础。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种新型壳聚糖酶CsnF及其制备方法。本发明所述壳聚糖酶CsnF产量高达367.6 U/mL，一步亲和纯化纯度95%，回收率高达92.2%。最适反应温度为70 ℃，最适pH为6.0，性质稳定，降解主产物为壳二糖和壳三糖。本发明所述壳聚糖酶CsnF产量高、制备方法简单、纯度高、稳定性好，具有良好的工业化应用潜质。

一方面，本发明提供一种新型壳聚糖酶CsnF，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

SEQ ID NO.1：

FAEASINSSGNSYTEIRAQLNNRSGWPAKKTDQLSFRYYVDLTEAVEAGYSAEDIKVTAGYNEGASVSELKPHDASKHIYYTEVSFSGVLIYPGGQSAHKKEVQFRLSAPDGTSFWNPENDHSYQGLSHALLKTRYIPVYDDGRLVFGHEPGYEKETPEDERDVPDNIKAFKESIVKQGSCNDPLAKGFHSADGDDGSYVYCGDHVKDYNVIYLQGTEGKLVNMDIDCDGIQGSSADDGRCGSSGDTQSVTSFQDRLRTYSTKQKDLDANIHPYVVFGNLGTKKNWPTFDAQKHGIKPLSIIAVVCGGKMFYGIWGDENGDDGEESMVGEAAISLATACFGKSMNGNNGHDADDVLYIAFPGSDAVPGDDGADWNATNFKDFESSLSSVGDKLVARINDTSSGNGTDSGDDDSGATRVWSTWGMGFCVVSVMAAMMI

另一方面，本发明还提供一种壳聚糖酶CsnF对应的核酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：