[发明专利]一种用于产气肠杆菌检测的试剂盒有效
| 申请号： | 201910549661.2 | 申请日： | 2019-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN110241237B | 公开（公告）日： | 2020-04-10 |
| 发明（设计）人： | 孙泽玮;陈文静;郑良荣 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 赵杭丽 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 产气肠杆菌 检测 试剂盒 | ||
1.一种用于产气肠杆菌检测的试剂盒，其特征在于，由特异性靶向产气肠杆菌rpoB基因的向导RNA、扩增引物对、水化TwistAmp基础试剂盒反应干燥球、LbCas12a蛋白、单链DNA探针、RNA酶抑制剂和缓冲液组成。
2.根据权利要求1所述的一种用于产气肠杆菌检测的试剂盒，其特征在于，其中特异性靶向产气肠杆菌rpoB基因的向导RNA的核苷酸序列如SEQ No.1所示，RPA扩增引物对的序列如SEQ No.2和SEQ No.3所示，单链DNA探针的序列如SEQ No.6所示。
3.根据权利要求1所述的产气肠杆菌检测的试剂盒进行产气肠杆菌快速检测的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：取1ml样品，95-98摄氏度加热5min，取1μl作为检测样品，加入14.75μl水化TwistAmp basic kit反应干燥球，0.9μl10mM RPA-F和RPA-R，0.375μlRibonucleaseInhibitor，3.5μlbuffer2.1，1000nM向导RNA，250nM LbCas12a，200nM单链DNA探针，加水补至25μl，37摄氏度反应25-45min，通过荧光显微镜下直接观察检测体系荧光变化，进行产气肠杆菌检测，发黄绿色荧光说明有产气肠杆菌污染，不发光说明没有产气肠杆菌污染。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中RPA-F的序列如SEQ No.2所示，RPA-R序列如SEQ No.3所示，向导RNA序列如SEQ No.1所示。
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