[发明专利]一种胶乳微球与抗体复合物的制备方法、产品及其应用

说明书

本发明公开了一种胶乳微球与抗体复合物的制备方法、产品及其应用。本发明提供两种制备方法，分别是“两步法”和“一步法”。“两步法”包括：1)羧基胶乳微球与氨基封端聚乙二醇衍生物支架进行反应，制得新型支架‑羧基胶乳微球复合物；2)将步骤1)中制备完成的新型支架‑羧基胶乳微球复合物与抗体进行反应，制得新型支架‑羧基胶乳微球‑抗体复合物。“一步法”包括：将抗体与高分子支架混合均匀，与合适粒径的羧基胶乳微球进行反应，制得新型支架‑羧基胶乳微球‑抗体复合物溶液。采用本发明所提供的制备方法，能够大大增强试剂稳定性、改善校准品线性、大幅度节约生产成本，不仅提高试剂性能，而且降低成本，具有非常好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种胶乳微球与抗体复合物的制备方法、产品及其应用，本发明属于体外诊断技术领域。

背景技术

胶乳增强免疫比浊法(latex-enhanced immunoturbidimetry)是近年开发的一种比较稳定、准确的均相液体蛋白免疫比浊检测方法，用于体外诊断检测。乳胶增强免疫比浊法通过在羧基胶乳微球表面偶联单克隆抗体或者多克隆抗体，然而当抗原与交联有抗体的胶乳微球结合后，在短时间内迅速聚集在一起，形成一定结构的复合物，改变了反应液的吸光度。而且吸光度的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在特定的范围内反映被测抗原的浓度。因此，利用抗原和抗体的特异性结合形成的一定结构的复合物，通过检测复合物形成量用于对抗原进行定量检测。

目前，胶乳增强免疫比浊法所使用的胶乳微球多为聚苯乙烯微球，包括羧基化胶乳微球、氨基化胶乳微球、甲苯磺酰基胶乳微球、醛基化胶乳微球等。通常对胶乳微球表面官能团进行修饰，与抗体通过共价键的形式结合，一方面提高与抗体的结合率，第二方面为提供了合适的三维结构与抗原进行结合，提升检测的敏感性和特异性。胶乳微球通常是纳米级粒子尺寸，属于原子簇和宏观体系过度区域，具有高比表面积的特性，加速吸附平衡的时间和吸附平衡的稳定性。大大增加了免疫比浊法在临床的广泛应用，胶乳增强免疫比浊法广泛应用于特种蛋白、肿瘤标志物等方面的检测，是非常实用的免疫测定技术。

随着体外诊断技术的发展，对试剂的质量要求越来越高，并且市场竞争压力越来越激烈，因此开发质量更高、成本节约型试剂成为本领域从业者所追求的目标。传统改善试剂性能的方法通常采用更换抗体厂家，更换微球大小，选用不同缓冲体系等，改善幅度很有限，并且会大大增加试剂的生产成本。

因此，本发明提出了一种新型的胶乳微球与抗体复合物的制备方法，不仅能够满足试剂性能检测要求，而且能够降低生产试剂的成本，在胶乳增强免疫比浊法检测领域将具有广阔的应用前景。

发明内容

鉴于传统胶乳微球抗体复合物制备的局限性，本发明的目的是提供一种新型胶乳微球抗体复合物的制备方法，以达到降低抗体使用量，降低成本，大幅度改善线性和增加稳定性的目的，用于解决传统胶乳微球抗体复合物线性差，不稳定和成本高问题。

为了实现上述目的及其相关目的，本发明采用了以下技术手段：

一方面，本发明提供了一种通过“两步法”制备胶乳微球与抗体复合物的方法，所述的胶乳微球与抗体复合物为氨基封端聚乙二醇衍生物支架(NH2-mPEG-R)-羧基胶乳微球-抗体复合物，包括如下步骤：

1)选用合适粒径的羧基胶乳微球与氨基封端聚乙二醇衍生物支架进行反应，制得氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物；

2)将步骤1)中制备完成的氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物与抗体进行反应，制得氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球-抗体复合物。

其中，优选的，所述的方法包括如下步骤：

1)制备氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物