[发明专利]一种胶乳微球与抗体复合物的制备方法、产品及其应用

权利要求书

1.一种通过“两步法”制备胶乳微球与抗体复合物的方法，其特征在于，所述的胶乳微球与抗体复合物为氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球-抗体复合物，包括如下步骤：

1)制备氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物

1-1)把0.1-1ml质量百分比分数浓度为5-10％的羧基胶乳微球加入5-10ml活化缓冲溶液A，将0.1mg-8mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)加入胶乳微球溶液中进行活化，磁力搅拌，混合均匀，得到EDC活化的羧基胶乳微球溶液；

1-2)将0.01-8ml质量百分比分数浓度10％氨基封端聚乙二醇衍生物溶液加入到EDC活化的羧基胶乳微球溶液中，室温搅拌2-4小时，混合均匀；

1-3)3000g-25000g离心处理，去除上清，用1-10ml活化缓冲溶液B进行超声复溶，换液重复3次，得到氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物溶液，以供后续使用；

2)制备氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球-抗体复合物

2-1)向步骤1)制备的氨基封端聚苯乙烯衍生物支架-羧基胶乳微球复合物溶液中加入5-50mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和7.5-75mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)进行活化，磁力搅拌，混合均匀；

2-2)用3000g-25000g离心处理10分钟，去除上清，用1-10ml偶联缓冲溶液进行超声复溶，换液重复3次，得到活化的复合物溶液；

2-3)将活化的复合物溶液加入到1-20ml 0.25mg/ml单克隆抗体或者多克隆抗体溶液中，室温搅拌2-4小时后，混合均匀；

2-4)将0.1-0.5ml封闭液加入步骤2-3)得到的混合物溶液中；

2-5)室温搅拌1小时后，3000g-25000g离心处理，去除上清，用保护液进行超声复溶，重复3次换液，得到氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球-抗体复合物溶液；

其中，所述步骤1)中所述的氨基封端聚乙二醇衍生物支架为单臂氨基封端聚乙二醇衍生物，所述的单臂氨基封端聚乙二醇衍生物的分子式如式I所示：

其中-R基为甲氧基(-OCH₃)、羟基(-OH)、叠氮基(-N₃)、醛基(-CHO)、丙烯酸酯基团(-COCHCH₂)、甲基丙烯酸酯基团(-COCCCH₂CH₃)、聚乳酸基团甲基氨基甲酸叔丁酯基团单臂聚乙二醇衍生物分子量(Mn)从400到20000；

其中，步骤1-1)中，羧基胶乳微球为聚苯乙烯微球，粒径范围从50-500nm，固含量5％-10％，表面电荷密度0.025-0.5meq/g，活化缓冲溶液A为MES缓冲溶液，浓度为0.01-0.1M，pH为4.5-6.5；步骤1-3)中，活化缓冲溶液B为MES、MOPs或PBS缓冲溶液，浓度为0.01-0.1M，pH为4.5-6.5；步骤2-1)中，EDC和NHS或Sulfo-NHS的质量比为1：1.5，EDC与氨基封端聚乙二醇衍生物支架-羧基胶乳微球复合物的质量比为1：20到10：1；步骤2-2)中，偶联缓冲溶液为PBS缓冲溶液、MES缓冲溶液、MOPs缓冲溶液、硼酸缓冲溶液(BB)或TAPs缓冲溶液，浓度为10-100mM，pH为5.5-7.8；步骤2-3)中，单克隆抗体和多克隆抗体为羊单抗、鼠单抗、兔单抗、人单抗、驴单抗、马单抗、羊多抗、兔多抗、鼠多抗、人多抗、驴多抗、马多抗，抗体与氨基封端聚乙二醇衍生物-羧基胶乳微球复合物的质量比为1：1000-1：20；步骤2-4)中，封闭液为TRIS-HCl或甘氨酸缓冲体系，浓度为5-1000mM，其中含有牛血清白蛋白的浓度为0.02-5％w/v，硫柳汞的浓度为0.2-1g/L；步骤2-5)中，保护液为PBS、TAPs、MOPs、BB或TRIS-HCl缓冲体系，pH为5.5-8.5，浓度为10-100mM，其中含有海藻糖浓度为1-15％w/v，甘露醇浓度为2-10％w/v，牛血清白蛋白的浓度为0.1-4％w/v，TWEEN-80浓度为0.01-0.05％w/v，硫柳汞的浓度为0.2-1g/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，单臂氨基封端聚乙二醇衍生物分子量为1000、2000、3400、5000、10000、20000。