[发明专利]一种靶向KRAS突变的异体抗原递呈细胞、构建方法及肠癌特异性CTL细胞的制备方法

权利要求书

1.一种靶向KRAS突变的异体抗原递呈细胞的构建方法，包括以下步骤： 1)分析某一肠癌患者的HLA分型和KRAS突变序列组合的亲和力，选择亲和力最高的组合合成融合基因；2)将步骤1)中合成的融合基因连接到表达载体上获得重组载体； 3)将步骤2)所述重组载体转入健康来源的单核细胞，进行诱导培养获得靶向KRAS突变的异体抗原递呈细胞；

所述融合基因还包括连接HLA分型和KRAS突变序列的剪切肽的编码序列；

所述肠癌患者的HLA分型包括HLA-A0206、HLA-A2601、HLA-B4001、HLA-B1301、HLA-C0304和HLA-C0702；

所述KRAS突变包括KRAS-G12A、KRAS-G12C、KRAS-G12D、KRAS-G12S、KRAS-G12V、KRAS-G13D和KRAS-Q61H；

所述剪切肽包括P2A、T2A和E2A中的一种。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述分析亲和力的工具为NetMHCpan4.0 Server在线软件。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，亲和力最高的组合为HLA-A0206和KRAS-G12D。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述融合基因表达的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。

5.权利要求1～4任意一项所述制备方法制备获得的靶向KRAS突变的异体抗原递呈细胞。

6.一种肠癌特异性CTL细胞的制备方法，包括以下步骤：用权利要求5中所述的靶向KRAS突变的异体抗原递呈细胞与来源于权利要求1中所述的肠癌患者的外周血单个核细胞中的T细胞进行共培养20～22d获得肠癌特异性CTL细胞。