[发明专利]一种用于合成谷胱甘肽的重组菌及其制备方法

说明书

本发明涉及一种用于合成谷胱甘肽的重组菌及其制备方法，所述的重组菌包括重组质粒，所述的重组质粒包括GshF片段和载体片段；所述的载体片段为pET‑22b。本发明的重组菌既能够高效表达谷胱甘肽，又能够减少谷胱甘肽的降解，从而使得合成谷胱甘肽的效率提高，生产成本和能耗降低。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种用于合成谷胱甘肽的重组菌及其制备方法。

背景技术

谷胱甘肽(γ-L-glutamyl-cysteinyl-glycine，GSH)是细胞内的一类非蛋白类巯基化合物，由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸三种氨基酸缩合而成的具有生物活性的三肽，谷胱甘肽具有游离的巯基和氧化还原能力，其是胞内最丰富的抗氧化剂，能够保护DNA、蛋白质免受ROS的伤害，此外谷胱甘肽还参与细胞信号的转导，是维持细胞正常生理活动必不可少的物质；同时，谷胱甘肽还能增强机体免疫力，发挥抗病毒作用。在食品行业，含有或添加谷胱甘肽的奶制品、肉类能够提高奶制品和肉类的保鲜能力，防止褐变，保持色泽和营养。谷胱甘肽还被用于化妆品行业，其能够改善皮肤光泽、缓解皮肤皱纹增多现象，因此国内外医药市场、食品，化妆品领域对于谷胱甘肽的需求正在稳步提升。

近年来，随着谷胱甘肽需求量的增多，市场迫切需要更多的谷胱甘肽，目前谷胱甘肽的生产方法主要有微生物发酵法、化学合成法、溶剂萃取法和酶催化合成法，其中属化学合成法生产的谷胱甘肽纯度最高，但由于化学合成的操作步骤复杂，成本高，对环境破坏严重，不利于可持续发展的理念。相对而言，微生物发酵法具有低成本，反应条件温和，生产效率高的优势而逐渐成为了生产谷胱甘肽的主要方法。微生物发酵法是通过克隆谷胱甘肽生物合成通路上的相关基因，将其构建到蛋白表达载体上，通过适当的宿主菌进行谷胱甘肽的生产。

谷胱甘肽的生物合成和基因的选择密切相关，随着生物技术的发展，诸多生物体内的谷胱甘肽合成酶被发现和克隆，一些生物体内的双功能谷胱甘肽生物合成酶基因具有无视谷胱甘肽反馈抑制作用，而通过将这些基因进行进一步发掘便能实现谷胱甘肽生物合成的产业化。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种能够高效合成谷胱甘肽的重组菌及其制备方法。

为解决以上技术问题，本发明采取如下技术方案：

本发明的一个目的是提供一种用于合成谷胱甘肽的重组菌，所述的重组菌包括重组质粒，所述的重组质粒包括GshF片段和载体片段；所述的载体片段为pET-22b。

优选地，所述的GshF片段位于所述的载体片段的T7启动子之下。

优选地，所述的GshF片段的DNA序列与SEQ ID NO.1所示序列至少具有80％的同源性。

进一步优选地，所述的GshF片段的DNA序列与SEQ ID NO.1所示序列至少具有85％的同源性。

更为优选地，所述的GshF片段的DNA序列与SEQ ID NO.1所示序列至少具有90％的同源性。

再优选地，所述的GshF片段的DNA序列与SEQ ID NO.1所示序列至少具有95％的同源性。

最优选地，所述的GshF片段的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

优选地，所述的重组质粒还包括抗性基因片段，所述的抗性基因片段为氨苄青霉素抗性基因片段，用以筛选重组菌。

本发明的另一个目的是提供一种所述的用于合成谷胱甘肽的重组菌的制备方法，包括如下步骤：

A)PCR扩增获得GshF片段；

B)将所述的GshF片段克隆入pET-22b中获得表达载体；

C)将所述的表达载体转化入受体菌得到阳性转化子，即为所述的重组菌。