[发明专利]杂化囊泡的制备方法及其制备得到的杂化囊泡、药物和应用

说明书

本发明提供了一种杂化囊泡的制备方法及其制备得到的杂化囊泡、药物和应用，涉及生物技术领域。该杂化囊泡的制备方法包括将含有脂质体和细胞来源囊泡的混合体系从核孔膜中反复挤出至脂质体和细胞来源囊泡杂化。该制备方法制备得到的杂化囊泡兼具生物相容性和稳定性，并且粒径分布均一，同时操作简单，杂化效率高，并且制备的过程中无杂质残留。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种杂化囊泡的制备方法及其制备得到的杂化囊泡、药物和应用。

背景技术

近年来小分子药物和生物大分子递送载体的开发和研究受到了广泛关注。这类递送载体可保护小分子药物、生物大分子如蛋白质或核酸的活性，以及避免某些蛋白酶或核酸酶的降解作用。某些递送载体还具有免疫佐剂的功能，可增强抗原诱发的免疫反应。

各种细胞来源囊泡因其来源于机体而具有非常好的生物相容性，此外，嵌入囊泡膜的功能性蛋白也有利于其在靶向递送领域的应用，为了将细胞来源囊泡用作递送载体，常常需要对囊泡膜或内水相进行修饰。

比如，为了克服外泌体有限的胶体稳定性和较短的血浆半衰期，可将亲水性聚合物PEG插入外泌体膜以增加其胶体稳定性并延长其血浆半衰期(Kim,M.S.,et al(2018).Nanomedicine：nanotechnology，biology，and medicine，14(1)：195-204.)。此外，特定的膜蛋白可以预先通过亲本细胞的遗传修饰掺入外泌体膜中(Takahashi,Y.,et al(2013).JBiotechnol 165(2)：77-84.)。然而，这些外泌体修饰方法都比较繁琐且效率较低。

还有一类细胞来源囊泡修饰方法是利用化学或物理方法诱导脂质体与细胞来源囊泡发生膜融合，从而将脂质体特定膜组分或内水相引入细胞来源囊泡膜或内水相。比如有研究利用化合物PEG诱导脂质体与外泌体发生膜融合，从而实现对外泌体膜的修饰(Piffoux,M.,et al.(2018).ACS Nano12(7):6830-6842)。还有研究利用物理方法如冻融诱导膜融合，从而将脂质体特定组分聚乙二醇磷脂插入外泌体膜，构建杂化外泌体(T.Sato,Y.,et al(2016).6：21933)。这类通过诱导脂质体与细胞来源囊泡发生膜融合的方法不仅可用于修饰囊泡膜，还能将脂质体内水相插入囊泡内水相，从而将功能分子载入囊泡膜。这种修饰方法同时实现囊泡膜的修饰和内水相的包载。化学诱导膜融合的方法需要在脂质体和外泌体的混合物中添加化学物质如PEG、Ca2⁺或Cu2⁺等，因此在膜融合诱导完毕需要采取额外的步骤除去(Piffoux,M.,et al.(2018).ACS Nano 12(7):6830-6842)。而冻融法诱导膜融合则常引起杂化囊泡的粒径变大、分布变宽的缺点(T.Sato,Y.,et al(2016).6：21933)，这不利于杂化囊泡作为递送载体的体内药动学特性(Pattni,B.S.,etal.(2015).Chemical Reviews 115(19):10938-10966.)，此外冻融法通常耗时6～8h以上，效率偏低。

综上现有技术方案的缺点有：(1)化学法诱导脂质体与外泌体膜或其它细胞囊泡融合需要添加外来化学物质如Ca²⁺或聚乙二醇，在诱导融合完成后需要采取额外步骤除去这些化学物质，且耗时较长。(2)冻融法诱导脂质体与外泌体膜或其它细胞囊泡融合的方法存在冻融法耗时较长，达通常达6～8h，且冻融制备的杂化外泌体或杂化细胞囊泡粒径分布很宽。(3)孵育法将功能分子载入外泌体或其它细胞囊泡耗时长，效率偏低。因此，一种改进的脂质体和细胞来源囊泡杂化的方法是目前需要的。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种杂化囊泡的制备方法，该制备方法具有脂质体和细胞来源囊泡杂化效率高、无杂质残留和杂化后得到的杂化囊泡粒径分布均一的优点。