[发明专利]鸡骨香挥发油抗肿瘤活性及其相关机制的测试方法及应用

说明书

本发明属于医药学技术领域，公开了一种鸡骨香挥发油抗肿瘤活性及其相关机制的测试方法及应用，所述鸡骨香挥发油抗肿瘤活性及其相关机制的测试方法为：依次进行细胞凋亡检测，Hoechst 33258染色，线粒体膜电位染色，活性氧种类测定，实时荧光定量PCR分析，蛋白质印迹分析（Image J灰度分析定量），数据统计分析。本发明表明鸡骨香挥发油通过线粒体介导的内源途径诱导A549细胞凋亡，能诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，是一种潜在的抗癌药物；因此，这些证据表明鸡骨香挥发油可作为一种新型化学预防或化学治疗剂用于癌症的治疗，为进一步开发用于临床分析的药物提供依据。

技术领域

本发明属于医药学技术领域，尤其涉及一种鸡骨香挥发油抗肿瘤活性及其 相关机制的测试方法及应用。

背景技术

目前，最接近的现有技术：

挥发油是从植物中获得的天然化合物，其成分因其相对安全的状态，消费 者的广泛接受以及对潜在功能用途的探索而越来越受到关注[1-3]。挥发油通常 成为评估传统医学疗效的重要指标[4]。从植物中提取的约300种挥发油在农业， 食品，化妆品和健康产业中很重要[5]。癌症是一个主要的公共卫生问题，是心 血管疾病之后的第二大全球性疾病。根据美国癌症协会的统计，美国总共估计 有1,685,210例新发癌症病例，2016年约有600,000例死亡病例[6]。迫切需要发 现高效且具有低毒性的新型治疗药物。

巴豆属属于大戟科，由大约1300种物种组成，广泛分布于热带和亚热带地 区[7]。该属植物是多种结构类型二萜的丰富来源，包括具有广泛生物活性的 clerodane，trachlobane，kaurane，crotofolane和pimarane，对人类健康是有益处 的。此外，三萜类化合物，黄酮类化合物和生物碱也曾在巴豆中发现[8]。

Croton crassifolius Geisel属于巴豆属，是一种经济上重要的草本植物，广泛种植于中国广东，福建和海南省，作为中药的商业生产[8]。自古以来，它的根 源，在中国被称为“鸡骨香”，已被用于处方治疗胃痛，风湿病，喉咙痛和癌症。 在先前分析C.Crassifolius根的化学成分的分析中，鉴定了不同类型的二萜，根 据它们的结构类型可分为clerodane，daphnane和tigliane型[9,10]。

植物内活性物质决定了植物的功效，前期与C.crassifolius相关的大量研究 基本上都集中于中极性提取物成分研究，而对于C.crassifolius内的挥发性成分 研究甚少，仅有很少的研究对比分析了超临界萃取与水蒸气蒸馏获得的鸡骨香 萃取物的抑制肿瘤细胞生长的作用，对于鸡骨香二氧化碳超临界萃取物的成分， 以及抗肿瘤作用的机制尚未报道。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)鸡骨香CO₂超临界萃取物所含的具体成分尚不清楚；

(2)鸡骨香CO₂超临界萃取物尽管之前报道过能够抑制肿瘤细胞增长，但 是对于人正常细胞的作用如何尚不清楚；

(3)鸡骨香CO₂超临界萃取物尽管之前报道过能够抑制肿瘤细胞增长，但 是具体的作用机制如：阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、诱导细胞自噬等尚未有 人研究。

解决上述技术问题的难度：挥发性成分结构类型非常复杂，且化合物之间 的区别较小，不易分离，通过GC-MS分析，仅仅进行简单的保留时间比对很难 准确鉴定单个成分。结合多种分析手段(正构烷烃标准品分析，MS片段分析等)， 对获得的超临界萃取物进行成分鉴定难度较大。

解决上述技术问题的意义：