[发明专利]2-肼喹啉在MALDI-TOF-MS中作为反应性基质检测小分子糖的方法

说明书

本发明涉及2‑肼喹啉作为基质在MALDI‑TOF‑MS分析糖类中的应用，2‑肼喹啉与糖类进行非还原胺化反应，从而对糖类进行衍生化，提高糖的离子化效率，由于2‑肼喹啉在355nm处有良好的紫外吸收，因此过量的2‑肼喹啉不需要除去，作为基质辅助分析物离子化，以此提高MALDI质谱检测糖类的灵敏度，降低检测限。同时，2‑肼喹啉在小分子区域基质干扰小，特别是在加入基质助剂氯离子之后，在负离子模式下得到衍生物与阴离子加合峰，谱图简单单一，小分子糖的信号强度得到很大提升，因此对小分子区域的糖类测定的灵敏度提高了三个数量级，同时还基质还能用于二糖的同分异构体的鉴定。

技术领域

本发明具体涉及2-肼喹啉（2-hydrazinequinoline，2-HQ）的化合物作为基质在基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix Assisted Laser Desorption IonizationMass Spectrometry，MALDI-MS）分析糖类中的应用，属于质谱检测领域。

背景技术

MALDI-TOF-MS是一种新型的软电离生物质谱，由于其样品制备简单，分析速度快，高通量，高灵敏度和高耐盐型使其已经发展成为一种用于分析各种类型的生物分子的不可或缺的分析工具，近年来得到了快速发展，在分析检测中发挥了重要作用。其基质的选择一直是关注的重点，基质性能的完善与提高可以使MALDI-TOF-MS的检测结果有更高的准确度和灵敏度、更小的背景噪音和更干净的谱图，常用的基质一般是一些具有共轭结构的有机小分子，与分析物形成共结晶，吸收激光能量传递给分析物使其离子化。

但是，在利用MALDI-TOF-MS进行糖类分析时，由于糖类与蛋白或者多肽相比，具有低离子化效率的特点，使 MALDI检测糖类存在很大的挑战。因此，在检测糖类的时候通常需要对其进行衍生化反应，然而常用的衍生化方法需要繁琐的样品纯化步骤，会导致样品损失，最终效率变低。同时由于常用基质一般为有机小分子，在低分子量区有严重的基质干扰，使得小分子糖的检测及其困难。

因此，亟需一种操作简单的糖类衍生化方法用于解决小分子区域糖难测定等问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明将2-肼喹啉作为基质应用在MALDI-TOF-MS分析糖类中，2-肼喹啉与糖类进行非还原胺化反应，从而对糖类进行衍生化，提高糖的离子化效率，由于2-肼喹啉在355nm处有良好的紫外吸收，因此过量的2-肼喹啉不需要除去，作为基质辅助分析物离子化，以此提高MALDI质谱检测糖类的灵敏度，降低检测限。同时，2-肼喹啉在小分子区域基质干扰小，特别是在加入基质助剂Cl离子之后，在负离子模式下得到衍生物与阴离子加合峰，谱图简单单一，小分子糖的信号强度得到很大提升，因此对小分子区域的糖类测定的灵敏度提高了三个数量级，同时还基质还能用于二糖的同分异构体的鉴定。

本发明所述的2-肼喹啉的结构式如式（1）所示：

式（1）

本发明的2-肼喹啉作为基质在MALDI-TOF-MS分析糖类中的应用的具体步骤如下：

步骤1：将2-肼喹啉溶于甲醇与乙酸体积比为10:1-50:1的溶剂中；

步骤2：将待测糖与步骤1制备的基质溶液混合，并于水浴65℃加热1.5h以上得到反应液；

步骤3：取步骤2中的反应液与0.37%的盐酸溶液以体积比1:1-10:1均匀混合；

步骤4：取步骤3制得的混合液点在与MALDI-MS配套的靶板上，在室温下自然冷却，待溶剂挥发结晶后直接进行MALDI分析。

作为本发明更优的技术方案：步骤1中所述的2-肼喹啉的浓度为5-25mg/mL。

作为本发明更优的技术方案：步骤1中所述的2-肼喹啉的浓度为10-15mg/mL。

作为本发明更优的技术方案：步骤1中所述的甲醇与乙酸体积比为20:1。