[发明专利]卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段其抗体制备方法和应用

说明书

本发明公开一种卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段其抗体制备方法和应用。通过克隆该多肽片段的基因并实现原核表达，纯化后得到该多肽片段。以该多肽片段作为抗原，制备兔抗血清，分离纯化抗血清，获得抗ORF57蛋白的多克隆抗体。细胞学和分子生物学实验研究表明，该抗体能够在细胞内和细胞外特异性结合ORF57蛋白，能够检测到进入细胞核内的ORF57蛋白。因此，该多克隆抗体可以用于卡波氏肉瘤相关病毒抗原的检测识别中或制备检测活病毒感染的检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及卡波氏肉瘤相关病毒的ORF57蛋白的C端片段的多克隆抗体制备方法和应用。

背景技术

卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma，KS)是一种艾滋病(Acquired ImmuneDeficiency Syndrome，AIDS)患者常见的并发症。卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’ssarcoma-associated herpesvirus，KSHV)；也被称为人类疱疹病毒8型(Humanherpesvirus 8，HHV8)是该肿瘤的病原体。此外KS也是许多非洲亚赤道地区国家最常见的癌症之一。人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的感染被认为是一种最重要的因素，可以显著提高KS发生的风险。KS的发病率在普通人群中是1/100,000，在HIV感染人群中上升至1/20，在HIV感染的男性同性恋人群中攀升至1/3。同时感染HIV和KSHV的男性如果没有接受有效治疗，有50％的可能在十年内发展为KS。

KS主要由梭形细胞，异常增生的血管和炎性细胞浸润组成。KSHV有两相生活周期：潜伏期和裂解期。KSHV可以根据环境调控两相生活周期。病毒裂解期发生时，开放阅读框架57蛋白(open reading frame 57，ORF57)在病毒裂解早期表达。蛋白ORF57可以提高病毒mRNA的稳定性从而促进KSHV完成裂解复制，缺失ORF57基因的病毒不能有效的产生成熟的病毒粒子。研究还发现ORF57调控白介素6和多种宿主蛋白的表达，抑制宿主细胞抗病毒防御。因此ORF57蛋白对于KSHV的感染起重要重要作用。

目前对蛋白ORF57的功能和生物特性的研究成果还很少，进一步深入研究需要针对该蛋白的特异性抗体，目前还未有的商品供应。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种针对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒蛋白ORF57的C端片段。

本发明的目的之二在于提供该疱疹病毒蛋白的C端片段的编码蛋白。

本发明的目的之三在于提供包含该C端片段的载体。

本发明的目的之四在于提供该C端片段的的克隆方法。

本发明首先针对蛋白ORF57的C端结构域设计了抗原肽段，并对该基因进行分子克隆并实现原核的高效表达。可以获得高纯度的重组蛋白ORF57的C端片段。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段，其特征在于该片段的的基因为SEQ ID NO:1所示的碱基序列。

上述的卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段的基因的编码蛋白，其特征在于该编码蛋白为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

一种载体，其特征在于该载体含有上述的碱基序列。

一种重组质粒，其特征在于该重组质粒包含上述的载体。

一种上述的卡波氏肉瘤相关病毒蛋白ORF57的C端片段的克隆方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.设计含有限制性内切酶位点的特异性引物，该特异性引物为SEQ ID NO:3和SEQID NO:4所示的碱基序列：