[发明专利]一种L-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种L-谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.9所示。

2.如权利要求1所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.10所示。

3.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1～2任一项所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体。

4.一种包含如权利要求3所述的核酸的重组表达载体。

5.一种包含如权利要求3所述的核酸或如权利要求4所述的重组表达载体的转化体。

6.一种L-草铵膦盐的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：在反应溶剂、L-谷氨酸脱氢酶突变体、无机氨基供体和还原型辅酶NADPH的存在下，将2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐进行氨化反应，即得L-草铵膦盐；其中，所述L-谷氨酸脱氢酶突变体为如权利要求1～2任一项所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括以下步骤：在D-氨基酸氧化酶的存在下，将D-草铵膦盐进行氧化反应，得到所述的2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐即可。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的D-草铵膦盐单独存在、或、与L-草铵膦盐共同存在；所述的与L-草铵膦盐共同存在的形式为D型富集的草铵膦盐、L型富集的草铵膦盐或消旋体草铵膦盐；

和/或，所述的D-氨基酸氧化酶的浓度为0.6-6U/mL；

和/或，所述的氧化反应在通气的条件下进行；

和/或，所述的氧化反应在过氧化氢酶的存在下进行；

和/或，所述的D-草铵膦盐的浓度为100-600mM；

和/或，所述的氧化反应的反应体系的pH为7-9；

和/或，所述的氧化反应的反应体系的温度为20-50℃。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的D-氨基酸氧化酶的浓度为1.8U/mL。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，当所述的氧化反应在通气的条件下进行时，所述通气的速率为0.5-1VVM。

11.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的D-草铵膦盐的浓度为200mM。

12.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的氧化反应的反应体系的pH为8。

13.如权利要求6-12任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体的浓度为0.05-3U/ml；

和/或，所述的无机氨基供体的浓度为100-2000mM；

和/或，所述的2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐的浓度为100-600mM；

和/或，所述还原型辅酶NADPH与所述的2-氧代-4-(羟基甲基氧膦基)丁酸盐的质量比为1:100-1:20000；

和/或，所述的无机氨基供体为氨气、硫酸铵、氯化铵、磷酸氢二铵、乙酸铵、甲酸铵和碳酸氢铵中的一种或多种；

和/或，所述的反应溶剂为水；

和/或，所述氨化反应的反应体系的pH为7-9；

和/或，所述氨化反应的反应体系的温度为20-50℃。

14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述的L-谷氨酸脱氢酶突变体的浓度为0.09U/ml。

15.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，所述的无机氨基供体的浓度为200mM。