[发明专利]血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法

权利要求书

1.一种血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法，其特征在于：先将EDTA螯合基质环境和cTnC本身所包含的Ca²⁺，再外加Ca²⁺使cTnC和Ca²⁺重新结合，最后通过EDTA螯合和cTnC结合的Ca²⁺，对Ca²⁺检测，从而定量测量血清中所有与cTnC结合的cTnI复合物；具体包括以下步骤：

(1)选用SRM(E)标准物质配制CaCl₂标准浓度曲线；

(2)用EDTA缓冲液配制cTnC的浓度梯度溶液；

(3)使用磁珠免疫亲和法提取血清中心肌肌钙蛋白I复合物；

(4)将提取出的复合物中加入500μL EDTA缓冲液；

(5)将配制的cTnC溶液和提取出的心肌肌钙蛋白I复合物冰上孵育过夜；

(6)将样品4℃透析24h，分别在5h、13h、20h时更换透析缓冲液；

(7)将样品超速离心，离心条件为温度4℃、转速12000r、时间30min；

(8)加入CaCl₂缓冲液500μL，常温振荡反应4h，超速离心；

(9)准确称量加入的500μLEDTA缓冲液摇床常温孵育过夜，超滤离心后进行ICP-MS检测分析；

(10)得到钙标准溶液浓度与CPS的拟合公式A；

将配制的cTnC溶液的CPS值代入拟合公式A，并得出样品内的Ca²⁺浓度，通过称量离心前与离心后离心管的质量差，将Ca²⁺浓度换算为质量单位，校正由于稀释和离心过程中由于体积变化而造成的实验误差，在实验过程中使用超纯水缓冲液中的Ca²⁺浓度忽略不计；

计算出的Ca²⁺质量与cTnC溶液浓度进行线性拟合，将通过质量法计算的cTnC的实际浓度与计算得到的溶液中钙离子质量拟合线性公式B；

将提取后的血清样品按照相同方法测得的CPS值代入两个线性拟合公式，并且校准体积后，得到血清中cTnI的定量结果。

2.根据权利要求1所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法，其特征在于：所述EDTA缓冲液为20mM Tris、200mM KCI、1mM DTT、5mM EGTA、10mM EDTA，pH6.5。

3.根据权利要求2所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法，其特征在于：所述透析缓冲液为20mM Tris、200mM KCl、1mM DTT，pH 7.5。

4.根据权利要求3所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法，其特征在于：CaCl₂缓冲液为20mM Tris、200mM KCl、1mM DTT、5mM CaCl₂，pH 7.5。

5.根据权利要求4所述的血清中心肌肌钙蛋白I复合物的非诊断目的的定量测量方法，其特征在于：ICP-MS方法采用全定量模式，检测Ca43、Ca44两种同位素。