[发明专利]一种稳定转基因体内递送的方法

说明书

本发明提供一种稳定转基因体内递送的方法，包括：携带治疗基因的AAV‑转座子杂合载体病毒和携带piggyBac转座酶的AAV病毒。以达到在个体发育阶段能够长期地在肝脏稳定表达外源转基因从而达到基因治疗的效果。

技术领域

本发明涉及一种稳定转基因体内递送的方法，属于基因疗法领域。

背景技术

基因治疗是从DNA水平治疗人类疾病的治疗手段，具体地是将人的 正常基因或有治疗作用的基因通过特定的基因治疗载体转移导入人体靶 细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用，从而达到治疗疾病的目的。

腺相关病毒(AAV)是一种可以感染人类和其他一些灵长类动物的单 链线状DNA缺陷型病毒。AAV属于Dependoparvovirus属，后者又属于 细小病毒科(Parvoviridae)。该病毒是一种小的(约20nm)复制缺陷 型无包膜病毒。AAV基因组两端为末端反向重复序列(ITR)，中间基因 组编码两个蛋白：Cap和Rep。ITRs对于病毒的复制和包装具有决定性 作用。Cap蛋白为病毒衣壳蛋白，Rep蛋白参与病毒的复制和整合。AAV 能感染多种细胞。该病毒会引起非常轻微的免疫反应，目前尚未证明AAV 会引起疾病。AAV本身并不会进行复制，只有存在辅助病毒如腺病毒或 疱疹病毒时AAV才能进行复制。重组AAV作为基因治疗载体，可以将转 基因递送至哺乳动物细胞中，可感染多种组织，可感染分裂和静止细胞， 通常是以非整合型附加体形态长期游离于染色体外。这些特征使AAV成 为基因治疗极具吸引力的病毒载体。

AAV载体已被成功用于治疗先天性黑蒙症、血友病A、血友病B 和脊髓性肌萎缩等疾病。但受限于其在细胞内的存在形态为非整合型附 加体，AAV载体只能被用于在非分裂期细胞的转基因递送。一旦被AAV 感染的细胞发生分裂，游离于染色体外的AAV基因组就会随细胞分裂而 被稀释，从而逐渐丧失治疗疾病的功效。以血友病为例，目前以AAV为 载体的血友病基因治疗，都在患者成年后肝脏发育完全后给药，生长发 育期的幼年患者依旧必须依赖于传统的血浆制品和重组蛋白凝血因子药 物。迄今为止，在生物医学领域还缺乏一个适用于个体生长发育阶段稳 定地在体靶向肝脏递送转基因的基因治疗载体。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一种稳定转基因体内递送的方法，以解 决上述问题。

本发明采用了如下技术方案：

一种稳定转基因体内递送的方法,其特征在于，包括：携带治疗基因 的AAV-转座子杂合载体病毒和携带piggyBac转座酶的AAV病毒。

本发明还提供一种携带治疗基因的AAV-转座子杂合载体病毒和携 带piggyBac转座酶的AAV病毒在制备基因治疗药物中的应用，其特征在 于：携带治疗基因的AAV-转座子杂合载体包含的元件从5’端到3’端 依次是：5’ITR：AAV2的5’末端反向重复序列；PBL：piggyBac转座 子左臂；CAG：鸡β-肌动蛋白复合启动子；治疗基因：治疗基因编码序 列；PA：兔β-球蛋白polyA；PBR：piggyBac转座子右臂；3’ITR：AAV2 的3’末端反向重复序列。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，携带治疗基因 的AAV-转座子杂合载体和携带piggyBac转座酶的AAV病毒均分别由 AAV8衣壳蛋白包装。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，所述治疗基因 为糖原贮积症I型的治疗基因。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，所述治疗基因 为血友病A的治疗基因。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，所述治疗基因 为血友病B的治疗基因。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，所述治疗基因 为苯丙酮尿症的治疗基因。

进一步，本发明的应用，还具有这样的特征：其中，所述基因治疗 药物为注射液。