[发明专利]一种干细胞冻存液及其制备方法和冻存方法

说明书

本发明公开了一种干细胞冻存液及其制备方法和冻存方法，所述干细胞冻存液包括如下重量份的组分：二甲基亚砜3～10份、人血白蛋白2～7份、海藻糖0.5～3份、右旋糖酐40 0.2～2份和羟乙基淀粉2～6份。本发明干细胞冻存液可长时间冻存细胞，并能显著降低细胞的冷冻损伤，使复苏后的细胞具有较高的活率和贴壁性，提高了细胞的冻存效率。同时，本发明干细胞冻存液的成分明确，所用组分均为医用药典注射级辅料，不含血清，有效防止运用异种血清而引入污染和过敏原的风险，且DMSO含量较低，降低了DMSO对细胞的负面影响，安全性高，稳定性好，符合CFDA和FDA的要求，可直接用于人体输注，适用于临床研究和治疗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种干细胞冻存液及其制备方法和冻存方法。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，已广泛用于科学研究和临床治疗。干细胞在细胞疗法、再生医学、药物发现、毒理学和发育生物学等方面具有广阔的应用前景。目前，世界范围内已有干细胞药物产品上市，随着科技的发展，干细胞会更加有效和广泛的用于各种疾病的治疗，以弥补传统药物治疗对于某些疾病效果不佳的情况。

干细胞的制备或临床应用过程中，其主要保存方式为储存于液氮中低温保存，待需要时再复苏用于继续培养或输注。细胞冷冻保存是生物研究中的重要环节之一，正常细胞在体外培养时随着代数的增加会出现衰老和功能丧失的情况，而细胞冻存对于防止细胞传代培养所导致的细胞退化、传代培养中的细菌污染、解决维持传代培养过程中的一系列问题具有重要作用。

目前，在细胞冷冻保存领域中，为保护细胞免受冷冻损伤，人们广泛采用的是在冻存液中添加冷冻保护剂(CPA)。而二甲基亚砜(DMSO)是细胞冷冻保存中最常用的冷冻保护剂，但过高浓度的DMSO对细胞存在一定的毒性，会引起细胞内蛋白变性，因而，不适的DMSO浓度选择会对细胞的保存有着很大影响。此外，现有常规使用的细胞冻存液一般都添加有血清，一方面，血清可保护细胞，降低细胞的冷冻损伤，还可降低DMSO对细胞的损伤；另一方面，血清可提供多种生长因子和营养，维持细胞活率。但血清的加入会存在引入污染和过敏原的风险，无法满足干细胞治疗的临床使用需求。因此，亟需开发出一种安全、细胞冻存效率高、可用于临床的干细胞冻存液。

发明内容

为解决上述现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种干细胞冻存液及其制备方法和冻存方法。本发明的干细胞冻存液，DMSO含量低，不含血清，能长时间冻存干细胞，使复苏后的干细胞具有较高的活率和贴壁性，可安全稳定地用于临床研究和治疗。

为实现其目的，本发明采取的技术方案为：

一种干细胞冻存液，其包括如下重量份的组分：二甲基亚砜3～10份、人血白蛋白2～7份、海藻糖0.5～3份、右旋糖酐40 0.2～2份和羟乙基淀粉2～6份。

二甲基亚砜(DMSO)能渗透到细胞内，增加胞内渗透压，降低冰点，延缓冻存过程，使细胞中部分水分在冻结前透出细胞，减少冷冻降温过程中胞内冰晶形成，从而保护细胞，减少细胞冷冻损害，增加本发明干细胞冻存液对细胞的保护作用。人血白蛋白(HSA)能在细胞冻存和复苏过程中保护细胞膜，提高冻存复苏过程中细胞的活力。海藻糖(Trehalose)是一种天然的小分子二糖，其可与细胞膜发生相互作用，在冻存和复苏过程中稳定细胞膜蛋白的结构，且海藻糖可形成玻璃态基质，减少细胞外部形成的冰晶对细胞造成的伤害，提高了本发明干细胞冻存液在细胞冻融过程中的活力。右旋糖酐40(Dextran 40)可提高细胞外的渗透压，减少细胞内的自由水，减少冻存过程中的冰晶形成造成的细胞损伤。

优选地，所述干细胞冻存液包括如下重量份的组分：二甲基亚砜3～10份、人血白蛋白2～7份、海藻糖0.5～3份、右旋糖酐40 0.2～2份、羟乙基淀粉2～6份和离子缓冲溶剂70～95份。本发明通过实验发现，该配方的干细胞冻存液能对细胞起到有效的冷冻保存作用，使用安全性高，能替代现有常规配方的含血清的冻存液。