[发明专利]光周期敏感基因、重组载体、重组细胞、重组体系及其应用在审
| 申请号： | 201910367958.7 | 申请日： | 2019-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN110129333A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 王丕武;金羽琨;王鑫雨;马义勇;曲静;关淑艳;张默;宋阳;张卓 | 申请（专利权）人： | 吉林农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/82;C12N5/10;A01H5/02;A01H6/82 |
| 代理公司： | 北京卓岚智财知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11624 | 代理人： | 任漱晨 |
| 地址： | 130000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 植物体 光周期敏感基因 重组细胞 重组载体 基因 分子生物学领域 感受态细胞 核苷酸序列 表达载体 调节植物 基因构建 目的基因 影响因子 影响植物 重组质粒 表达量 光周期 农杆菌 生育期 冻融 扩增 延迟 应用 大豆 体内 开花 转化 | ||
1.一种大豆光周期敏感基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.含有所述权利要求1所述光周期敏感基因的重组载体，重组细胞或者重组体系。
3.权利要求1所述光周期敏感基因在延迟植物开花，调整植物生育期的应用。
4.根据权利要求3所述的光周期敏感基因在延迟植物开花，调整植物生育期的应用，其特征在于，所述的应用步骤如下:
将所述大豆光周期敏感基因与第一质粒载体在连接克隆体系中反应，获得第一重组质粒；
以所述第一重组质粒为模板，在含有预定的扩增引物的扩增体系中进行扩增，获得目的基因片段；
将第二质粒载体在预定的酶切体系中进行酶切处理2-3h后，在60-68℃条件下限制酶失活，获得线性化载体；
将所述线性化载与所述目的基因片段混合，在孵育器反应，获得植物过表达载体；
将所述植物过表达载体通过冻融法转化农杆菌感受态细胞中，获得重组细胞；
将所述重组细胞按照预定的方法引入植物体，获得含有光周期敏感基因的植物体。
5.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述RT-PCR扩增，扩增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3所示。
6.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述RT-PCR扩增，扩增条件为：预变性：94℃，5min；变性：94℃，40s；退火：52-62℃，40s；延伸72℃，40s；后延伸72℃，8min；循环数为34个。
7.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述预定酶切体系具体包括：
限制性内切酶BglⅡ、限制性内切酶BstEⅡ、内切酶缓冲溶液和双蒸水。
8.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述以所述第一重组质粒为模板，在含有预定的扩增引物的扩增体系中进行扩增，获得目的基因片段方法中，预定的扩增引物为如SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列。
9.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述将所述植物过表达载体通过冻融法转化农杆菌感受态细胞中，获得重组细胞中，获得重组细胞的具体方法包括：
将所述植物过表达载体加入到解冻的农杆菌感受态中，冰浴后在液氮中冷冻1-3min，在35-38℃水浴中融化后加入YEP液体培养基，获得混合细胞悬浮液；
将所述混合细胞悬浮液放置在摇床以转速为120-150rpm的条件下振荡2-4h后，在转速为5000-7000rpm的条件下离心4-7min，获得悬浮菌液；
将所述悬浮菌液吸出涂于有抗性的YEP固体培养基上，并在26-28℃培养箱中培养24-36h。
10.根据权利要求4所述的应用步骤，其特征在于，所述将所述重组细胞按照预定的方法引入植物体，获得含有光周期敏感基因的植物体的方法获得含有光周期敏感基因的植物体方法中预定的方法至少包括浸染法和花粉管道法。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吉林农业大学，未经吉林农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910367958.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
