[发明专利]一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测J亚群禽白血病病毒抗体的ELISA试剂盒，其特征在于，包括包被截短表达的ALV-J gp85蛋白的酶标板，其中，所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括HRP标记的兔抗鸡IgG、阳性对照、阴性对照、封闭液、稀释液、显色液、洗涤液和终止液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为J亚群禽白血病病毒阳性动物血清；所述阴性对照为健康动物血清；所述封闭液为50g/L脱脂奶粉；所述稀释液为含有1%w/v牛血清白蛋白的PBST缓冲液；所述显色液为显色液TMB；所述洗涤液为PBST缓冲液；所述终止液为2M H₂SO₄。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒用于检测J亚群禽白血病病毒抗体时，具体的包括以下步骤：

（1）包被截短表达的ALV-J gp85的酶标板4℃过夜后用洗涤液洗涤，37℃下用封闭液封闭1h，洗板；

（2）加入对照和待测血清样品，37℃孵育，洗板；

（3）加入HRP标记的兔抗鸡IgG，37℃孵育，洗板；

（4）加入TMB显色液，37℃显色，最后加终止液终止反应，测定OD_{405 nm} 值，当OD_450nm值≥0.20时，判定为阳性。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，截短表达的ALV-J gp85的包被量为2μg/ml，血清样品的稀释倍数为1:500，HRP标记的兔抗鸡IgG的稀释度为1:3000，血清样品、HRP标记的兔抗鸡IgG及TMB的作用时间分别为30min、30min和15min，封闭液为50g/L脱脂奶粉。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白经由保藏编号为CGMCC NO.17418的稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系表达、纯化后获得。

7.权利要求1-6任一项所述的试剂盒在制备检测J亚群禽白血病病毒抗体试剂中的应用。

8.稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系，其特征在于，命名为293F-JTgp85，该细胞系保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为CGMCCNO.17418。

9.一种截短表达的ALV-J gp85蛋白，其特征在于，由权利要求8所述的稳定表达截短ALV-J gp85的293F细胞系表达产生，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

10.编码权利要求9所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白的核苷酸序列。

11.如权利要求10所述的核苷酸序列，其特征在于，所述的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

12.权利要求9所述的截短表达的ALV-J gp85蛋白在制备检测J亚群禽白血病病毒抗体试剂中的用途。