[发明专利]一种丙型肝炎病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种丙型肝炎病毒检测试剂盒。本发明提供丙型肝炎病毒检测试剂盒，其包括检测丙型肝炎病毒核心抗原的第一抗体和第二抗体，其中第一抗体针对丙型肝炎病毒核心抗原第95‑117位氨基酸序列中的表位或特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第95‑117位氨基酸序列，第二抗体针对丙型肝炎病毒核心抗原第55‑72位氨基酸序列中的表位或特异性结合丙型肝炎病毒核心抗原第55‑72位氨基酸序列。本发明的试剂盒灵敏度高，稳定性好，操作简单，可用于早期急性丙型肝炎的快速检测。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域。具体而言，本发明涉及丙型肝炎病毒的检测方法和试剂盒。

背景技术

丙型肝炎是严重威胁人类健康的传染病之一,目前还没有有效的疫苗防止其传播。直接抗病毒药物(DAAs)的出现大大提高了丙型肝炎治疗效果，但目前DAAs药物尚未在中国上市。我国现阶段HCV感染者接受抗病毒治疗的主要方案仍然是基于干扰素的治疗方案。在临床表现上与乙型肝炎相比,丙型肝炎症状较轻、发展慢、重症化少见,不易引起临床医师和患者的重视。HCV主要是通过输血及输入血液制品传播,丙肝病毒可引起急性或慢性感染。急性丙肝病毒感染通常没有症状，且仅在十分罕见情况下才会导致危及生命的疾病。约有15％-45％的感染者不经任何治疗即可在感染6个月之内自行清除病毒。其余60％–80％的感染者会发生慢性丙肝病毒感染。在这些慢性丙肝病毒感染者中，20年内出现肝硬化的危险为15％–30％。丙型肝炎治疗难度大、疗程长、疗效欠佳、费用高,所以选择理想的检测方法及早检出HCV非常重要。

HCV为有包膜呈球形的正单链RNA病毒，属于黄病毒家族，全长约9500碱基。HCV基因组两侧分别为5’和3’非编码区，中间为开放读码框(ORF)，分为结构区和非结构区。结构区包括核心蛋白区(C)和两个包膜蛋白区(E1、E2)，分别编码核心蛋白和包膜蛋白。非结构蛋白区包括NS2、NS3、NS4和NS5区，编码功能蛋白，如蛋白酶(NS2、NS3和NS4A区)，螺旋酶(NS3)以及依赖RNA的RNA多聚酶(NS5B区)。丙肝病毒核心蛋白约含190aa，在病毒复制中起到非常重要的作用。通常采用基因工程表达上述结构和非结构蛋白作为包被抗原，来建立抗-HCV检测的ELISA方法。HCV基因组具有显著的异质性，同一基因组不同区段变异程度有显著差别。5’非编码区最为保守，已成为HCV分子诊断研究的焦点。

目前HCV的检测方法主要有三种：HCV抗体检测、HCV核心抗原检测，HCV核酸检测丙型肝炎病毒RNA。HCV抗体检测是目前医院及血站判断及筛选患者是否感染HCV病毒最常用的方法，但其致命缺点是存在“窗口期”，即HCV感染后至HCV抗体产生中间有40-70天的时间，献血员已经被感染并具有传染性，但是用目前的抗体检测试剂没法检出，该阶段称为感染后血清阳转前的窗口期(Preseroconversion Window Phase,PWP)。窗口期的存在是输血感染的主要原因。目前丙型肝炎的输血后感染占肝炎病例的70％，而在丙型肝炎病毒感染者中更有80-90％是属于输血后感染。在HCV核酸出现后的1-2天内，感染者体内就会出现HCV核心抗原，而且与HCV核酸的水平具有一定的相关性，可以作为HCV检测的标志物。HCV核酸检测(NAT)是三种检测中方法最可信的一种，在感染的初期就能检测出来，同时还能反应病毒的含量，主要用于抗病毒治疗的选择与疗效监测，但它需严格按照PCR操作规程操作，检测人员需经过专业培训并取得相应资质，且样本的质量控制要求高，必须是采血后2小时内低温条件送检，无菌抽提RNA，容易因为操作、设备及环境等因素造成误差，从而产生假阳性或假阴性，不利于在普通医院推广，市场份额比较小。