[发明专利]用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒

说明书

本发明涉及用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒。本发明提供一种用于BRCA1/2基因的扩增子文库构建试剂盒，所述试剂盒包含：1)用于进行第一轮PCR扩增的第一引物，2)用于进行第二轮PCR扩增的第二引物，3)第三引物和第四引物，其用于以第二轮PCR扩增产物为模板进行第三轮PCR扩增，构建目的基因的扩增子文库，其中第一引物和第二引物为BRCA1/2基因的特异性引物，其中上述1)、2)和3)分别置于分开的容器中。本发明的试剂盒自动化构建扩增子文库，显著降低了操作的繁琐程度和对检测样本的需求量，提高了测序数据的整体质量。

技术领域

本发明涉及用于基因检测文库构建的自动化试剂盒。具体而言，本发明涉及用于构建BRCA1/2基因变异检测文库的自动化试剂盒。

背景技术

耗资30亿美元历时10余年完成的人类基因组计划(Human Genome Project，HGP)给基因组学研究带来了天翻地覆的变化，通过测定人类基因组DNA的序列，探寻基因在染色体上的位置，明确基因的结构和功能，解读人类的全部遗传信息，人类第一次在分子水平上全面认识自我。新一代测序技术催生了丰富多彩的基因组图谱。

新一代测序技术又称大规模平行测序(massively parallel sequencing，MPS)，是指采用“边合成边测序”的原理、对于几十万到几百万DNA分子同时进行平行的测序反应，然后通过生物信息学分析所得到的原始图像数据或电化学信号、最终得到待测样品的核酸序列或拷贝数等信息的测序技术，又称为高通量测序、深度测序等。

然而，有些研究并不需要对全基因组进行测序，而只需对特定的基因组区域进行研究。扩增子测序就是通过设计感兴趣的基因组区域的引物，通过PCR扩增，将目标区域DNA富集后进行高通量测序的研究策略。

扩增子测序技术通常会使用大量的引物，为了避免大量引物二聚体的生成，常见的方法是将反应体系从一管拆分至多管，从而降低每管反应中引物的数量，减少引物二聚体的生成。但是该方法，大大增加了操作的繁琐程度及检测样本的需求量。同时，目前主要的扩增子建库技术，对目标区域进行扩增时，通常会使用多循环PCR程序，由于不同引物之前扩增效率不同，通过双向引物指数型PCR扩增，经过多循环PCR程序后，扩增区域的均一性会出现显著的差别，最终可能导致测序数据质量整体变差。

对于BRCA1/2基因变异检测文库，当前方法均需手工添加各种试剂，构建时间较长，且不易确保实验操作的一致性。另外，如上所述，现有构建方法中需要将反应体系从一管拆分至多管，减少引物二聚体的生成，并且还需考虑不同引物扩增效率的不同导致的扩增区域均一性的显著差别而对PCR过程进行人工干预，难以实现整个构建过程的全自动化。

发明内容

发明人对当前新一代测序过程使用的扩增子测序技术存在的不足进行针对性研究，提出了新的BRCA1/2基因变异检测文库构建方法，大大缩短了变异检测时整个文库构建流程所需的工作量，同时降低了对样本量的需求。在新的BRCA1/2基因变异检测文库构建方法的基础上，发明人进一步设计适合本发明方法的整套全自动BRCA1/2基因变异检测文库构建试剂盒，从而实现整个构建实验过程不需要人工干预的真正的全自动文库构建。