[发明专利]治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液及其制备方法

权利要求书

1.一种治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

包括悬浮的脐带动脉旁干细胞和溶剂。

2.根据权利要求1所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述溶剂为富含血小板的脐带血浆。

3.根据权利要求2所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述脐带动脉旁干细胞的含量为5×10⁶/mL。

4.根据权利要求1所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述溶剂为含有人血清白蛋白的注射用PBS。

5.根据权利要求4所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述脐带动脉旁干细胞的含量为5×10⁶/mL；

人血清白蛋白的含量为PBS体积的5％。

6.如权利要求2所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液的制备方法，其特征在于：

脐带动脉组织培养后衍生出动脉旁干细胞，酶解法消化获得单个所述脐带动脉旁干细胞，经PBS洗涤两次后，再与所述富含血小板的脐带血浆轻轻混匀，获得脐带动脉旁干细胞注射液。

7.根据权利要求6所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述脐带动脉旁干细胞的制备过程为：

足月生产后取新鲜人脐带7-15cm，4h内用含有10％青链双抗和1％肝素的PBS冰上4℃运至实验室；

在超净工作台内取出脐带，挤出脐带中的血，PBS反复冲洗直至无血液和血块后，剪刀修齐两断面，沿脐带内血管长轴方向剪开脐带，用镊子钝性分离脐带动脉；

将脐带动脉沿与脐带动脉垂直方向剪碎至1-2mm³大小组织块，组织块均匀铺于100mm细胞培养皿底，放置于5％CO²、37℃饱和湿度的培养箱内3h；

然后缓慢加入5ml DMEM-LG培养基至100mm皿中，轻放置于培养箱中培养；

第一周第3天和第7天各加DMEM-LG培养基3ml、2ml，之后第二周半量换液2次，之后第三周全量换液2次，期间观察组织块周围贴壁细胞爬出情况；

3周后细胞长到80％融合时去除脐带动脉组织块，0.05％胰酶消化，传代培养；

取P3-P5代细胞用于注射悬液制备。

8.根据权利要求6所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，所述富含血小板的脐带血浆的制备方法为：

在50mL离心管中加入750IU肝素钠收集脐带血40mL；

在室温下200g低速离心10-15min，收集上层液体；

对所述上层液体再次2000g高速离心10min，血小板沉积离心管底部，弃去部分上清血浆，留200uL血浆及底部沉积的血小板，轻轻重悬获得富含血小板的脐带血浆。

9.根据权利要求6所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液，其特征在于：

其中，获得的脐带动脉旁干细胞的单细胞悬液，使用不含钙、镁的PBS洗涤2次，然后细胞沉淀采用所述富含血小板的脐带血浆加以重悬，轻轻混匀制成脐带动脉旁干细胞注射液；

所述脐带动脉旁干细胞注射液放于4℃短暂储存，12h内使用，使用前轻轻摇匀。

10.如权利要求4所述的治疗缺血性疾病的脐带动脉旁干细胞注射液的制备方法，其特征在于：

脐带动脉组织培养后衍生出动脉旁干细胞，酶解法消化获得单个所述脐带动脉旁干细胞，使用不含钙、镁的PBS洗涤两次，然后细胞沉淀采用含有5％人血清白蛋白的PBS加以重悬，轻轻混匀制成脐带动脉旁干细胞注射液；

所述脐带动脉旁干细胞注射液放于4℃短暂储存，12h内使用，使用前轻轻摇匀。