[发明专利]一种弯曲毛细管电泳检测多酶的方法

说明书

本发明属于生物分析领域，具体涉及一种弯曲毛细管电泳检测多酶的方法。首先将量子点与多肽结合形成双酶探针，然后将毛细管电泳所用的毛细管分别弯曲成不同个数的半圆，固定后，先进样双酶探针，间隔10s后进样水解酶，一定时间后，水解酶追赶上双酶探针，并在弯曲毛细管内充分混合，经荧光光谱仪检测双酶探针的荧光强度。上述技术方案操作简单，可重复性高，建立了一种新的高灵敏多酶检测技术。

技术领域

本发明属于纳米生物技术领域，具体涉及一种弯曲毛细管电泳检测多酶的方法。

背景技术

当前迅速发展并广泛应用的各种酶传感器，将反应与检测两个步骤紧密结合起来，具有快速、方便、灵敏、精确的特点，在酶检测中发挥了巨大的作用，且更进一步推动了酶检测法的发展。通常情况下，使用单一酶底物来检测一种特定的酶，这就造成了检测选择性单一的缺点，而且操作起来较为复杂。

另一方面，毛细管电泳作为一种高分辨率、高灵敏、高通量及低样品小号的微分离技术，在生物分析领域具有广阔的应用前景。同时，通过荧光检测与毛细管电泳相结合，大大提高了检测线，拓展了毛细管的应用。通常采用直的毛细管进行样品的分析与测定。

发明内容

为解决现有技术中尚无快速、高效、便捷地检测多种酶的方法，本发明的目的在于提供一种弯曲毛细管电泳检测多酶的方法，首先，设计含有多个酶切位点的多肽与量子点结合形成多酶探针，利用弯曲毛细管电泳检测不同酶在毛细管内水解多酶探针的情况。利用毛细管弯曲有利于样品在管内充分反应的特点，研究水解酶在毛细管内水解双酶探针的情况。通过毛细管电泳分析检测，并计算荧光染料Cy5的峰面积(S_665nm)与QDs的峰面积(S_605nm)比值来判断FRET变化情况，从而实现水解酶的检测。

本发明所采用的技术方案为：将量子点与多肽结合形成双酶探针，再将电泳所用的毛细管分别弯曲成不同个数的半圆，固定后，先进样双酶探针，间隔10s后进样水解酶，经荧光光谱仪检测双酶探针的荧光强度；所述的弯曲毛细管为石英毛细管。

所述的水解酶为PreScission蛋白酶和凝血酶。

所述多肽含有(1)双酶切位点；(2)用于和量子点发生FRET的荧光染料Cy5；(3)和量子点结合的6×组氨酸。

所述多肽含有的双酶切位点为LEVLFQGP和LVPRGS。

所述多肽序列为Cy5-D₃LEVLFQGPGLVPRGSGP₉G₂H₆(Cy5-LEVLVP-QD)。

所述量子点为含有Zn的量子点，如CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdSe/ZnSe或CdTe/ZnSe。

所述的双酶探针为1μM量子点与8μM多肽等体积混合孵育10min得到。

所述的弯曲毛细管的内径为75μm，外径为365μm，弯曲的半圆个数为1-4个，弯曲的直径为3cm。

所述的弯曲毛细管为180°等宽圆弧弯曲毛细管。

所述双酶探针的进样时间为15s，所述水解酶的进样时间为15s，所述的水解酶进样间隔为10s。

采用上述技术方案后，本发明所取得的有益效果是：基于CE-FL可以使用一种底物同时检测多种酶，这个设计可以快速筛选来自微生物或其他环境的未知酶。操作简单，可重复性高，进一步拓展了荧光探针在生物分析领域的应用。

附图说明