[发明专利]一种组织中泰乐菌素残留的检测方法

权利要求书

1.一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1、制备供试品样品：

(1)将称量好的组织用淋洗溶剂淋洗，匀浆，提取，涡旋，超声，离心处理，得到上清液；

(2)重复上述提取步骤一次，第二次离心处理，合并两次上清液；

(3)在步骤(2)得到的上清液中加入蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液，蒸干，得到残渣；

(4)用有机溶剂溶解步骤(3)中的残渣两次，合并两次溶解液；

(5)HLB固相萃取小柱净化；

(6)氮气吹干洗脱液，加流动相溶解残渣，过滤溶解液，经HPLC检测滤液，制成供试品样品；

步骤2、绘制标准曲线

取泰乐菌素标准储备液，用流动相依次稀释成10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0.5ppm、0.2ppm和0.1ppm的标准工作品溶液，用HPLC检测，每种浓度每天重复测定5次，重复操作5天，将所得峰面积均值与对应浓度作线性回归，绘制标准曲线并得到线性回归方程和相关系数；

步骤3、测定

吸取上述标准工作品溶液和供试品样品进行检测，根据外标法计算泰乐菌素残留量；采用高效液相色谱仪对组织中残留的泰乐菌素进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、制备供试品样品：

(1)用淋洗溶剂将组织淋洗干净，5000r/min匀浆5min，然后将组织置于50mL离心管中，加入提取剂，涡旋5～6min，超声10min，4℃，4000r/min离心10min，取上清液于另一离心管中；

(2)重复提取步骤一次，第二次10000r/min离心，合并两次上清液；

(3)将步骤(2)得到的上清中液加入0.5mL蛋白沉淀剂，涡旋2min，4℃，10000r/min离心10min，取上清液于旋转蒸发瓶中，置于旋转蒸发仪上蒸干，得到残渣；

(4)用有机溶剂溶解步骤(3)中的残渣两次，合并两次溶解液；

(5)HLB固相萃取小柱净化，HLB小柱净化过程如下：HLB柱先依次用3mL甲醇、3mL水活化，将上述溶解液倾倒至HLB柱中，控制流速小于3mL/min，用3mL5％氨水、3mL水先后淋洗，抽干，6mL乙腈洗脱，收集洗脱液；

(6)置45℃氮气吹干，加流动相1mL溶解残渣，溶解液过0.22μm有机滤膜，滤液经HPLC检测；

步骤2、绘制标准曲线

取泰乐菌素标准储备液，用流动相依次稀释成10ppm、5ppm、2ppm、1ppm、0.5ppm、0.2ppm和0.1ppm的标准工作品溶液，用HPLC检测，每种浓度每天重复测定5次，重复操作5天，将所得峰面积均值与对应浓度作线性回归，绘制标准曲线并得到线性回归方程和相关系数；

步骤3、测定

吸取上述标准工作品溶液和供试品样品进行检测，根据外标法计算泰乐菌素残留量；采用高效液相色谱仪对组织中残留的泰乐菌素进行检测。

3.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述淋洗溶剂为3mL体积分数5％氨水、3mL水。

4.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述提取剂为乙腈。

5.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述组织与提取剂的料液比为1:4。

6.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述流动相为0.1M的甲酸铵-乙腈混合液。

7.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：所述蛋白沉淀剂为体积分数为10％的乙酸锌溶液。

8.根据权利要求2所述的一种组织中泰乐菌素残留的检测方法，其特征在于：步骤(4)中所述有机溶剂为体积分数为的2％偏磷酸和体积分数为20％甲醇的水溶液。