[发明专利]一种二氢吡唑啉酮类化合物的晶型及其制备方法

说明书

本发明涉及一种二氢吡唑啉酮类化合物的晶型及其制备方法。具体而言，本发明涉及1‑(6‑(2‑氧杂‑8‑氮杂螺[4.5]癸烷‑8‑基)嘧啶‑4‑基)‑4‑(1H‑1,2,3‑三唑‑1‑基)‑1H‑吡唑‑5‑醇钠的A晶型和B晶型。其通过将2‑(6‑(2‑氧杂‑8‑氮杂螺[4.5]癸烷‑8‑基)嘧啶‑4‑基)‑4‑(1H‑1,2,3‑三唑‑1‑基)‑1,2‑二氢‑3H‑吡唑‑3‑酮在有机溶剂中制成钠盐并析晶获得。其可以用于预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病。

技术领域

本发明涉及1-(6-(2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1H-吡唑-5-醇钠的A晶型和B晶型及其制备方法，以及其在制备用于预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病的药物中的用途。

背景技术

在低氧环境中，机体能够自发的发生低氧反应以维持机体的氧获得能力。1992年，Semenza等发现一种蛋白能够特异性结合于促红细胞生成素基因的低氧反应元件(HRE)，并影响某些基因的表达，该蛋白被称为低氧诱导因子(HIF)(Semenza GL等人,Mol.CellBiol.,1992,12,5447–5454)。HIF的靶基因十分广泛，能够影响机体造血功能、血管生成、铁离子转运、葡糖利用、抵抗氧化应激、细胞分化、细胞生存和凋亡、细胞外基质稳态以及肿瘤发生。HIF是α、β亚基组成的异质二聚体，α亚基属于功能性亚基，对细胞内氧浓度的变化非常敏感并受高度调控，有调节HIF活性的作用；β亚基是结构亚基，又称作芳基烃受体核转运蛋白(ARNT)，在细胞内稳定表达，其mRNA转录和蛋白的表达水平不受氧浓度变化的影响。HIF的α、β亚基都属于碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族成员。人类的HIFα有HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α三种亚型。HIF-1α在体内呈普遍性分布，并在局部组织缺血或缺氧引发的血管生成过程中有重要作用，但是对铁代谢过程的影响较小；HIF-2α呈局限性分布，对肾组织EPO(促红细胞生成素)基因表达和合成的过程中有重要作用，此外，还通过上调十二指肠的细胞色素和二价金属转运体-1的表达提高铁在肠道的吸收，并且有降低肝杀菌肽表达的作用，在铁代谢过程中起主导作用；HIF-3α的结构与其他亚型不同，没有DNA结合区域，不能影响基因的表达。研究表明，HIF-3α可能在HIF介导的基因表达中有负调节的作用。因此，HIF-1α、HIF-2α在低氧反应过程中发挥一定的作用。一项HIF-1α、HIF-2α基因缺失的小鼠试验中，证实HIF-1α、HIF-2α在低氧反应过程中的必要性。而治疗慢性肾性贫血的化合物研发中，HIF-2α的变化较HIF-1α更重要。

2001年研究发现，HIF-PHD能够将O₂和2-OG作为底物，特异性对HIFα脯氨酸残基进行羟基化，从而调节HIF的生物活性。HIF-PHD的催化循环反应在Fe²⁺与2-OG集中至PHD活性部位时启动。之后PHD与HIFα脯氨酸残基相互结合，用O₂替换水分子完成羟基化。整个过程中抗坏血酸是必不可少的催化剂，Fe²⁺、O₂、2-OG都是不可或缺的因素。

HIF-PHD拥有PHD1，PHD2，PHD3三个不同的亚型，表现出不同的组织分布，并选择性对HIFα亚型进行羟基化。PHD1表达稳定，并不会因为缺氧而被诱导，在体内氧平衡的维护中有一定的作用；PHD2在氧依赖调节HIFα活性的反应中扮演重要角色；常氧环境下PHD2、PHD3分别选择性作用于HIF-1α、HIF-2α，分别对HIF-1α第402、564位和HIF-2α第405、531位脯氨酸残基进行羟基化，羟化后的HIF-1α、HIF-2α能够与VHL E3泛素连接酶复合体结合而被泛素化，继而进入蛋白酶体内被降解。细胞处于低氧环境时，PHD2、PHD3活性因O₂稀缺而受到抑制，未被降解的HIF-1α、HIF-2α进入细胞核与HIF-β结合，在p300/CBP的协同下作用于低氧反应元件(HRE)，促进相关基因(如EPO)的表达，提高蛋白水平，从而促进红细胞生成，纠正贫血症状。