[发明专利]轮状病毒疫苗组合物及其制备方法

说明书

本申请涉及轮状病毒疫苗组合物及其制备方法。本发明提供了包括轮状病毒抗原、稳定剂和缓冲液的轮状病毒疫苗组合物。本发明中的缓冲液被预混合在轮状病毒疫苗组合物中以中和胃部的高度酸性pH，而无需在疫苗施用前单独施用抗酸剂。具有本发明的缓冲液的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。

本申请是申请日为2013年4月23日，申请号为201380033018.5，发明名称为“轮状病毒疫苗组合物及其制备方法”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及新型轮状病毒疫苗组合物以及用于制备该新型轮状病毒疫苗组合物的方法。更具体地，本发明涉及包括轮状病毒抗原、稳定剂和新型缓冲液的新型轮状病毒疫苗组合物。缓冲液被预混合在本发明的轮状病毒疫苗组合物中。本发明的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。

背景技术

在全世界，轮状病毒是严重的脱水性腹泻的最常见原因。每年，五十多万小于5岁的儿童死于轮状病毒腹泻。这些轮状病毒相关的死亡多于80％发生在撒哈拉以南的非洲和南亚的发展中国家。此外，轮状病毒引起发展中国家和发达国家中全部腹泻住院治疗的25–50％，并且门诊卫生医疗每年接纳两千三百万幼儿。几乎每个孩子在5岁之前便已感染了轮状病毒。由于轮状病毒疾病的巨大全球负担，针对这种病原体的疫苗的开发在过去三十年就已经是优先事项。市购可得的两种活的、口服施用的轮状病毒疫苗是(Merckand Co.有限公司，PA,USA和Sanofi Pasteur MSD SNC,Lyon,France)和(GSKBiologicals,Rixensart,Belgium)。在2009年4月和10月，WHO的战略咨询专家组(SAGE)查阅了来自非洲和亚洲的不同人群的另外的效力数据，以及在美国许可后(post-licensure)的研究，并将疫苗接种推荐推广到世界所有地区。

轮状病毒衣壳由三个同心蛋白层组成。由VP7和VP4组成的外层在病毒进入宿主细胞期间丢失。通过用胰蛋白酶(其将VP4裂解为VP8*和VP5*两段，VP8*和VP5*)处理并通过用胰蛋白酶补充培养基的组织培养，轮状病毒野外分离株(field isolate)可被调适(adapted)为高滴度生长。已知蛋白酶抑制剂减弱轮状病毒的体外和体内复制。当与三层颗粒(TLP)缔合时，胰蛋白酶失活并且不能接近蛋白酶抑制剂，诸如抑肽酶。当外层被钙螯合剂溶解时，释放VP5*、VP8*和VP7，并且缔合的胰蛋白酶被活化，允许裂解病毒衣壳蛋白，以及其他外源蛋白。表明，胰蛋白酶抑制剂的加入显著降低细胞中病毒mRNA和病毒蛋白的合成，并且发挥主要的抑制效应，如果在病毒进入细胞时存在胰蛋白酶抑制剂的话。这指示轮状病毒颗粒摄入胰蛋白酶可增强其感染性。

通过用胰蛋白酶处理来增强感染性。胰蛋白酶通过允许病毒的非传染性部分裸露在受感染的细胞中而将该部分转化为传染性病毒。发现胰蛋白酶裂解牛轮状病毒的88,000道尔顿的结构多肽，生成67,000道尔顿和20,000道尔顿的裂解产物。用胰蛋白酶(猪起源)活化轮状病毒被认可，并在感染后也进行培养基中胰蛋白酶的添加以获得最佳产量。然而，胰蛋白酶的来源是猪源的，即来自猪。已表明来自猪来源的胰蛋白酶可能包含不期望的其他污染性病毒如猪圆环病毒1和2。当猪源胰蛋白酶用于培养轮状病毒时，还可发现痕量的其他风险性污染物如多氯联苯(PCB)。因此，在可能的程度上从轮状病毒培养的生物工艺中避免动物来源的胰蛋白酶是重要的。另外，由于猪相关的产品还是某些宗教信仰特别是世界上伊斯兰地区的障碍，因此绝对不含猪来源物的疫苗将更为有益和有用的。工艺开发研究被启动以引入重组胰蛋白酶的使用来克服疫苗制剂中PCB和其他动物来源产物的风险，重组胰蛋白酶的使用是该生物工艺中的新型步骤的。重组胰蛋白酶不含动物组分(ACF)、活性极为特异、不含污染性糜蛋白酶、不含动物来源的外来物质，并且对人类消耗是安全的。