[发明专利]一种采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法及应用

权利要求书

1.一种采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）人血浆样品前处理：人血浆样品通过蛋白沉淀法进行前处理；

（2）液相色谱-质谱联用检测：以Inertsil C8-3作为色谱柱，采用呋塞米-d5作为内标，以乙腈和0.15％甲酸-水作为混合流动相，所述混合流动相中乙腈和0.15％甲酸-水的体积比为85:15；其中，0.15％甲酸-水中含5mM乙酸铵；流速0.7 mL/min，柱温40℃，进样量7 μL；

（3）人血浆中呋塞米浓度的测定。

2.权利要求1所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，在配制内标沉淀剂时，内标沉淀剂中呋塞米-d5内标的浓度为20~500 ng/mL。

3.权利要求2所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，内标沉淀剂的配制过程如下：称取呋塞米-d5对照品，用体积比为50:50的乙腈与水混合溶液溶解得到浓度为0.100 mg/mL的呋塞米-d5储备液，再加入乙腈稀释得到浓度为100 ng/mL的呋塞米-d5内标沉淀剂。

4.权利要求3所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，人血浆样品加入内标沉淀剂，涡旋及离心后取上清液为待测样品。

5.权利要求4所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，取100μL人血浆样品直接加入300 µL的内标沉淀剂，涡旋及离心后取上清液为待测样品。

6.权利要求3或5所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，涡旋及离心的条件为：涡旋5min，在4℃条件下以4000 rpm/min速度离心10 min。

7.权利要求1所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，质谱谱条件为：采用电喷雾离子源，负离子多反应监测（MRM）扫描，喷雾电压-4200 V，内源气1（N₂）55psi，气体2（N₂）50psi，离子源温度 500℃，呋塞米反应监测离子，[M-H]^-，m/z 329.1→205.0，CE值-25 eV，呋塞米-d5，[M-H]^-，m/z 334.1→290.1，CE值 -22eV。

8.权利要求1所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，色谱条件包括：色谱柱的长度为150 mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.0µm。

9.权利要求1所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米的方法，其特征在于，将待测样品置于自动进样器，进行液相色谱-质谱联用检测，进样器温度8℃。

10.权利要求1所述的采用液质联用检测人血浆中呋塞米方法在快速检测临床药代动力学样本方面的应用。