[发明专利]一种耐镉乳酸菌及其分离纯化方法

说明书

本发明首次从四川老泡菜汁中分离筛选出了一种新的耐镉乳酸菌GDMCC60377，其固体耐受镉浓度高达9000mg/L，液体耐受镉浓度高达900mg/L；在pH值5‑6，温度37℃的条件下，所述耐镉乳酸菌GDMCC60377对50mg/L镉溶液的吸附率在60‑70％，对100mg/L镉溶液的吸附率在35‑45％，对200‑700mg/L镉溶液的吸附率在20‑30％，对200‑700mg/L镉溶液的吸附率在10‑15％；上述指标均远远优于现有的耐镉乳酸菌，并且随着温度的升高，耐镉乳酸菌GDMCC60377对镉的吸附率还会持续上升，直至48℃之后趋于平稳。

技术领域

本发明涉及乳酸菌技术领域，具体是一种耐镉乳酸菌及其分离纯化方法。

背景技术

在所有重金属污染问题中，镉因其生物毒性大、移动性强成为最受关注 的对象之一，而通过食物摄入是镉进入人体的最主要渠道。当镉被人体吸收 后，自然排泄是一个非常缓慢的过程，因此，使用解毒剂驱排体内蓄积的镉 是预防及治疗镉中毒的优选措施。但这些药物治疗方法单一，还存在副作用 多、安全性差、价格昂贵、疗程较长等问题。螯合物还会结合除镉之外的其 他金属，甚至体内的一些必需微量元素，若长时间服用会影响机体健康。

由于农产品/食品重金属镉污染问题日趋严重，寻找能够移除食品及人体 中的重金属镉的方法已然迫在眉睫。虽然已发现了许多能够吸附重金属镉的 微生物，但它们通常是环境工业微生物或条件致病菌，无法应用于食品行业。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种从四川老泡菜汁中分离筛选出来的耐镉 乳酸菌，该乳酸菌已于2018年5月28日保藏于广东省微生物菌种保藏中心， 地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No.60377，分类学名称为绿色魏斯氏菌(Weissella viridescens)。

所述耐镉乳酸菌GDMCC60377固体耐受镉浓度高达9000mg/L，液体耐 受镉浓度高达900mg/L；在pH值5-6，温度37℃的条件下，所述耐镉乳酸菌 GDMCC60377对50mg/L镉溶液的吸附率在60-70％，对100mg/L镉溶液的吸 附率在35-45％，对200-700mg/L镉溶液的吸附率在20-30％，对200-700mg/L 镉溶液的吸附率在10-15％。此处需要说明的是，随着温度的升高，耐镉乳酸 菌GDMCC60377对镉的吸附率还会持续上升，直至48℃之后趋于平稳。

本发明还提供上述耐镉乳酸菌GDMCC60377的分离纯化方法，包括以下 步骤：1.将梯度稀释后的四川老泡菜汁涂布于MRS培养平板中，倒置培养3-5 天，直至有大量乳酸菌类似菌落长出；2.挑取数株长势优越的乳酸菌类似菌落 并进行划线分离和驯化，直至得到纯的单菌落；3.将单菌落在MRS培养平板 或MRS液体培养平板上进行划线分离，并不断提升培养基中的镉浓度，对菌 株进行耐镉培养，筛选出在高浓度镉培养基中生长情况较好的乳酸菌株。

作为一种优选方案，所述耐镉乳酸菌GDMCC60377接种量为2-12％，在 无镉液体培养基中最佳接种量为2％，在100mg/L镉浓度的液体培养基中最佳 接种量为6％。

作为一种优选方案，所述耐镉乳酸菌GDMCC60377培养温度控制在 20-37℃，最佳培养温度为20℃；在100mg/L镉浓度的液体培养基中的最佳活 化时间为22-26h，最佳培养时间为26-32h。

作为一种优选方案，所述MRS液体培养基，以重量计包括以下成分组成： 牛肉膏10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、吐温-801mL、柠檬酸二胺2g、乙酸钠 5g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁2g、硫酸锰0.25g、葡萄糖20g、蒸馏水1L，调 pH值至5-7，最佳pH值为7。