[发明专利]N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的生产方法

说明书

本发明涉及N‑叔丁氧羰基‑L‑亮氨酰‑L‑苯丙氨酸甲酯（N‑Boc‑L‑Leu‑L‑Phe‑OMe）的生产方法，此法包括使2‑(7‑氧化苯并三氮唑)‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸盐（HATU）溶液与N‑叔丁氧羰基‑L‑亮氨酸（N‑Boc‑L‑Leu）溶液同步连续泵入第一微反应器中在线生产活化酯，然后在线生产的活化酯与L‑苯丙氨酸甲酯盐酸盐（L‑Phe‑OMe•HCl）溶液同步连续泵入第二微反应器中进行成肽反应。本发明用于生产N‑叔丁氧羰基‑L‑亮氨酰‑L‑苯丙氨酸甲酯，优化条件下原料L‑苯丙氨酸甲酯盐酸盐转化完全，产品N‑叔丁氧羰基‑L‑亮氨酰‑L‑苯丙氨酸甲酯收率大于99.5%。本发明具有反应时间短、原料消耗少、收率高、过程连续等优点。

技术领域

本发明涉及一种N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的生产方法，特别涉及N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯的连续生产方法。

背景技术

N-叔丁氧羰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯（简称N-Boc-L-Leu-L-Phe-OMe，CAS号:5874-73-7），在多肽合成等生物有机方面有着广泛的应用，也是合成蛋白酶体抑制剂卡非佐米的重要中间体。目前主要合成方法是用N-叔丁氧羰基-L-亮氨酸（简称N-Boc-L-Leu，CAS号: 13139-15-6）和L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐（简称L-Phe-OMe•HCl ，CAS号: 7524-50-7）通过氨基酸缩合反应生产肽键制得。

肽键的形成是氨基在羧基上的亲核取代反应，涉及一个四面体中间体，然而，在室温下，羧酸与氨或胺的反应产物是铵盐而不是酰胺。因此，羧基组分必须在肽键形成前活化。此外，成肽反应必须在温和的反应条件进行。目前，形成肽键最常用的方法是碳二亚胺法、混合酸酐法、活化酯法等。

碳二亚胺法以N,N-二环己基碳二亚胺（DCC）为代表。DCC 活化羧基的反应机理N-保护的氨基酸同DCC 反应首先生产活化中间体O-酰基脲，然后活化中间体O-酰基脲与氨基酸酯反应则生产肽酯，并释放出一分子的N,N-二环己基脲(DCU)。目前，碳二亚胺法通常是在釜式反应器里进行，间歇式操作，反应需要严格控制加料顺序，为保证N-保护的氨基酸同DCC反应全部转化成活化中间体O-酰基脲，该步骤通常需要30 min以上，且温度通常在25℃以下，氮气保护下滴加模式操作，活化中间体O-酰基脲生产后需妥善保存后尽快使用。

混合酸酐法是50年代初期发展起来的。开始是用酰基氨基酸同二苯基磷酸形成的混合酸酐，然后是用同二苄基磷酸形成混合酸酐以及同苯甲酸形成的混合酸酐。混酸酐法原料有时转化不完全，且副产物较多。混合酸酐法对反应条件的选择和控制非常严格，比如反应温度通常需要控制在0℃以下。目前，混合酸酐法通常是在釜式反应器里进行，间歇式操作，反应需要严格控制加料顺序，生产混合酸酐的步骤通常需要30 min以上，氮气保护下滴加模式操作，混合酸酐生产后需妥善保存后尽快使用。

活化酯法发展于1951年魏兰德(Wieland)和谢飞(Shoefr)采用硫代苯酯，许为彻(Sehwyzer)1955年采用氰甲酯提高了酯的活性，从而可用于肽的合成。活化酯法通常在釜式反应器里进行，间歇式操作，反应速度通常较慢，反应需要严格控制加料顺序，生产活化酯的步骤通常需要30 min以上，且温度通常在25℃以下，氮气保护下滴加模式操作，活化酯生产后需妥善保存后尽快使用。

综上可知，目前，N-Boc-L-Leu-L-Phe-OMe的生产通常是在釜式反应器中进行，采用间歇式工艺，需要严格控制加料顺序，反应时间较长，反应温度通常在25℃以下，并且需要氮气保护，收率较低，中间产物如活化酯保存不便需尽快使用。

因此，如何通过改进N-Boc-L-Leu-L-Phe-OMe的间歇式生产工艺，提高反应收率，缩短反应时间，改进中间活性物的存储及使用模式是亟需解决的问题。

发明内容

上述目的通过如下技术方案实现：