[发明专利]一种酶法测定肌酐的检测试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及生化检测领域，具体涉及到的是一种酶法测定肌酐的检测试剂盒及其使用方法。该试剂盒包括利用由保藏号CGMCC No.17306的LYH18菌株制备的基因工程菌GLYH18制备出的肌氨酸氧化酶、肌酸酶、过氧化氢酶和缓冲液等各种试剂，通过将样品与试剂混合，再将最终反应物置于生化分析仪下，检测吸光度变化的情况从而测算出肌酐的含量。试剂盒中的肌氨酸氧化酶的制备方法简单，成本低，加入此酶的试剂盒能够快速、准确的测定出样品中肌酐的含量，且试剂盒在室温下能够保持稳定，更有利于实践应用，也更有利于工业化生产。

技术领域

本发明涉及生化检测领域，具体涉及到的是一种酶法测定肌酐的检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

肾脏疾病病因复杂，由于大多数“原发性”肾小球疾病发病机制尚不完全清楚，目前肾小球疾病的治疗以经验性治疗为多，缺乏病因性治疗的手段，也正因如此，在肾小球疾病治疗领域，前瞻性、随机对照的临床治疗试验非常有限。尽管如此，回顾过去三十年，在每个阶段还是有一些标志性的治疗方法被用于临床，并在一定程度上提高了肾脏疾病的治疗水平。

肾脏疾病的主要临床表现有蛋白尿、血尿、水肿、高血压、肾功能不全等。多年来，临床医生根据患者的病史、体检和化验检查进行综合分析，总结出肾小球疾病的几大临床症候群，如急性肾炎综合征、肾病综合征、急进性肾炎综合征、慢性肾炎综合征等作为临床诊断的依据并指导治疗，在肾活检技术开展以前，对肾脏病的诊断与治疗起到了积极的作用。

肌酐(creatinine，Cr)是人体肌肉组织中肌酸及磷酸肌酸代谢终产物，血液中Cr水平受饮食中摄取的外源性Cr及人体内产生的内源性Cr的影响，正常成人Cr生成速率基本稳定，血Cr及尿Cr测定广泛应用于评估肾小球滤过功能。

测定血清肌酐的方法主要有两种一种是碱性苦味酸速率法，一种是肌氨酸氧化酶法。碱性苦味酸速率法法由于线性范围窄，特异性差，易受样本中其他物质如酮体、抗坏血酸、胆红素、头孢、多巴胺等干扰，出现检测偏差，已逐渐退出市场。目前市场使用较多的为肌氨酸氧化酶法。

肌氨酸氧化酶法的原理是通过肌酐酶的作用使体内的肌酐水解成肌酸和尿素，肌酸又可经一系列反应生成H₂O₂，生成的H₂O₂偶联Trinder反应，再通过比色法测定肌酐水平。反应原理如下：

有很多研究表明该法的准确度优于碱性苦味酸法，抗干扰能力相对较好且交叉污染相对较少，虽然现在酶法因其碱性苦味酸速率法较高的稳定性和特异性而受到越来越多临床实验室的青睐，但仍有很多因素可干扰该方法的检测结果。

羟苯磺酸钙和酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰对被施用这两种药物的患者造成很大的不便。例如，对于糖尿病患者而言，常伴发肾功能不全，而所施用的羟苯磺酸钙对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能造成糖尿病患者肾功能不正确评估，掩盖并延误病情。而对于手术患者，所施用的酚磺乙胺对肌氨酸氧化酶法检测肌酐的负干扰可能使得不能正确评估其肾功能，造成术后并发症，影响患者的预后。

胆红素(bilirubin)是由体内铁卟啉化合物代谢产生的具有抗氧化性的混合物，主要有两种存在形式，一类与白蛋白结合的称为结合胆红素(CBIL)，另一类未与白蛋白结合的称为游离胆红素(FBIl)。胆红素不仅因颜色特性对比色检测方法有干扰，而且因其具有抗氧化性对Tinder反应指示的反应体系也有干扰。胆红素对酶法测定肌酐产生负干扰，这是因为胆红素作为还原剂与Tinder反应体系中氧化剂H₂O₂发生反应，使得终产物减少，如在试剂中加入亚铁氰化钾、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶等可消除胆红素的干扰。

发明内容