[发明专利]一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺

权利要求书

1.一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、原料基体准备：原料基体包括米糠50-60％，板栗壳40-50％,将米糠和板栗壳烘干、除杂、粉碎，过筛，得原料基体；

步骤二、制备发酵培养基：取原料基体，向原料基体中加入原料基体质量的1-1.5％的葡萄糖、0.3-0.5％的氯化钙、0.1-0.2％的氯化钠、0.05-0.1％的磷酸氢二钾，0.1-0.3％的七水合硫酸镁，加入原料基体重量的1-2倍水，1倍的马铃薯液为发酵底物；

步骤三、接种酵母菌：将种子液10-15％的接种量接种于发酵培养基上，菌种与发酵培养基混菌后于25-35℃下静置培养48-72h，得到发酵液；

步骤四、均质破壁：将步骤三中所得发酵液通过高压均质机，常温下，高压均质，得到破壁均浆物；

步骤五、分离、过滤、脱色：将步骤四中所得破壁均浆物通过粗过滤或者离心的方式，去除粗杂质，然后将得到液体进行二次过滤，二次过滤用孔径为500nm的陶瓷膜进行处理，然后进行脱色处理，得到滤液；

步骤六、选择分离：将步骤五中所得滤液经过连续色谱选择分离得到神经酰胺。

2.根据权利要求1一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺，其特征在于：所述酵母菌选用假丝酵母菌、汉逊酵母菌和酿酒酵母菌中的一种。

3.根据权利要求1一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺，其特征在于：所述种子液的制备方法为，用接种钩挑取低温保藏的斜面菌株，接种于液体种子培养基中，置于恒温摇床培养箱中，在28℃、120r/min条件下培养24h，其中液体种子培养基采用葡萄糖1％、蛋白胨0.5％，麦芽膏0.3％，蒸馏水配置。

4.根据权利要求1一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺，其特征在于：所述步骤五中脱色工艺在50-100rpm搅拌状态下加入0.3-0.8％活性炭脱色，升温至45-55℃，保温25-50min,当脱色后清液透光率达到70％以上后经板框滤除废炭，并吹出废炭中的残液，接着再顶水后吹空气，如此重复2-4次。

5.根据权利要求1一种酵母菌发酵法制备神经酰胺的工艺，其特征在于：所述步骤六中连续色谱采用大孔树脂连续色谱柱，先用体积浓度为20％的乙醇除去杂质，再用体积浓度为40-50％乙醇洗脱，最后用体积浓度为60-90％的乙醇洗脱，得到富含神经酰胺的溶液。