[发明专利]人型支原体的LAMP检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201910223917.0 | 申请日： | 2019-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN109943653A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 夏勇;劳梦晓;郭旭光;汤昕;林丽英;李磊 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学附属第三医院（广州重症孕产妇救治中心;广州柔济医院） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 向薇;万志香 |
| 地址： | 510170 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 人型支原体 试剂盒 基因序列 区域设计 特异引物 检测线 灵敏度 引物组 样本 基因 检测 劳动 | ||
1.一种人型支原体的LAMP检测引物组，其特征在于，所述检测引物组包括：
上游外引物F3：核苷酸序列为SEQ ID NO.7；
下游外引物B3：核苷酸序列为SEQ ID NO.8；
上游内引物FIP：核苷酸序列为SEQ ID NO.9；
下游内引物BIP：核苷酸序列为SEQ ID NO.10；
上游环引物LoopF：核苷酸序列为SEQ ID NO.11；
下游环引物LoopB：核苷酸序列为SEQ ID NO.12。
2.一种人型支原体的LAMP检测试剂盒，其特征在于，包含有权利要求1所述的LAMP检测引物组。
3.根据权利要求2所述的人型支原体的LAMP检测试剂盒，其特征在于，还包括：dNTPs、引物工作液、缓冲液、甜菜碱、Mg2+溶液、荧光染料和DNA聚合酶中的至少一种。
4.一种非诊断目的的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样品的DNA；
(2)以待测样品的DNA为模板，以权利要求1～3任一项所述的LAMP检测引物组为引物，进行实时荧光LAMP反应。
5.根据权利要求4所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，在实时荧光LAMP反应体系中，所述检测引物组的浓度比上游内引物FIP：下游内引物BIP：上游外引物F3：下游外引物B3：上游环引物LOOPF、下游环引物LOOPB为(7～9)∶(7～9)∶1∶1∶(3～5)∶(3～5)。
6.根据权利要求5所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，所述检测引物组的浓度比上游内引物FIP：下游内引物BIP：上游外引物F3：下游外引物B3：上游环引物LOOPF、下游环引物LOOPB为8∶8∶1∶1∶4∶4。
7.根据权利要求4～6任一项所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，在实时荧光LAMP反应体系中，
所述上游内引物FIP的终浓度为1～2μmol/L；
所述下游内引物BIP的终浓度为1～2μmol/L；
所述上游外引物F3的终浓度为0.1～0.3μmol/L；
所述下游外引物B3的终浓度为0.1～0.3μmol/L；
所述上游环引物LOOPF的终浓度为0.7～0.9μmol/L；
所述下游环引物LOOPB的终浓度为0.7～0.9μmol/L。
8.根据权利要求4～6任一项所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，所述实时荧光LAMP反应体系，按每25μl计，包括：
9.根据权利要求8所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，所述扩增反应液包括：dNTP、反应缓冲液、MgSO4和甜菜碱。
10.根据权利要求4～6任一项所述的人型支原体的LAMP检测方法，其特征在于，所述实时荧光LAMP反应的反应程序为：63±1℃15s，63±1℃45s作为一个循环，做50～70个循环，95±1℃15s终止反应，于63±1℃45s处收集荧光信号。
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