[发明专利]冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用。本发明提供的组合物，能够显著性的提高脐带间充质干细胞在冻存条件下的活性，而以其制得的干细胞制剂，具有良好的成骨分化、成软骨分化的潜能，从而能够具有良好的修复软骨损伤的作用，从而起到治疗骨关节炎的效果。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用。

背景技术

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种严重危害人类健康的慢性骨关节疾病，其在关节病中数量最多，超过类风湿性关节炎、强直性脊柱炎等其他关节炎的总和。在病理水平，骨关节炎表现为关节软骨的破坏及骨赘的异常增生，以致临床上出现关节疼痛、活动受限及关节畸形等表现。同时，骨关节炎是导致青壮年劳动力下降的最主要病因，造成重大经济负担。

骨关节炎以严重的、局限性软骨破坏，深达骨质为特点。关节软骨由软骨细胞和细胞外基质构成，由于软骨内无血管、淋巴管及神经组织，同时软骨细胞增殖能力有限，不能迁移，因此关节软骨损伤后其自我修复能力很弱。随着衰老，关节内的多种细胞如软骨细胞，滑膜细胞，间充质干细胞均发生细胞衰老和功能退化。因此，向关节内移植有生物活性的软骨细胞能够补充凋亡细胞或抵抗细胞衰老，细胞移植可以为骨关节炎的治疗提供一种新的思路。

细胞治疗骨关节炎近年来发展较快，并得到了广泛关注。脐带来源的间充质干细胞治疗骨关节炎既具有其他来源间充质干细胞扩增分化容易，具有抗炎和招募作用等优势，又具有获得量大、无伦理问题、取材过程无痛苦、高增殖特性、多能分化特性、低免疫源性、无致瘤性等特点，是目前临床细胞治疗最常用的种子细胞。但如何提高脐带间充质干细胞的活率，以及如何提高脐带间充质干细胞冻存后的复苏能力，是目前亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供冻存液及其在脐带间充质干细胞冻存中的应用。该冻存液能够维持间充质干细胞在冻存期间活性。

本发明提供的冻存液由如下体积份的液体组成：

一些实施例中，本发明所述的冻存液由如下体积份的液体组成；

本发明中，所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的质量分数为20％；所述葡萄糖注射液中葡萄糖的质量分数为5％；所述羟乙基淀粉注射液中羟乙基淀粉的质量分数为6％。

本发明提供的组合物用于细胞冻存液，能够显著性的提高细胞的存活率。经过冻存6个月后细胞存活率仍可达95％以上。

本发明所述的冻存液在脐带间充质干细胞冻存中的应用。

本发明还提供了一种脐带间充质干细胞冻存方法，其以本发明所述的冻存液重悬脐带间充质干细胞。

本发明中，所述脐带间充质干细胞为人类脐带间充质干细胞。

本发明中，所述重悬至细胞密度为1×10⁶～1×10⁸cells/ml。

一些实施例中，所述重悬至细胞密度为5×10⁷cells/mL。

本发明中，所述冻存的温度为-196℃。

本发明中，所述冻存后，还包括复苏的步骤。所述复苏的条件为37℃-42℃。

本发明所述的冻存液在制备干细胞制剂中的应用。

本发明还提供了一种干细胞制剂，其包括：脐带间充质干细胞和本发明所述的冻存液。

本发明所述的干细胞制剂中，所述脐带间充质干细胞的密度为1×10⁶～1×10⁸cells/ml。