[发明专利]核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用在审
| 申请号： | 201910201832.2 | 申请日： | 2019-03-18 |
| 公开（公告）号： | CN109929864A | 公开（公告）日： | 2019-06-25 |
| 发明（设计）人： | 杨蕊菊;杨兴林;刘晓芬;夏清梅;杨佳丽 | 申请（专利权）人： | 和元生物技术（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/864;C12N7/01;C07K14/02 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 陆惠中;王永伟 |
| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核苷酸序列 基因表达载体 病毒感染 基因工程领域 特异性启动子 转基因表达 临床研究 优化元件 载体容量 质粒转染 应用 验证 基因 携带 科研 改进 保证 | ||
1.一种含有WPRE-polyA元件的核苷酸序列tWPRE，其特征在于，所述tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种基因表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE。
3.根据权利要求2所述的基因表达载体，其特征在于，所述载体包括骨架质粒。
4.根据权利要求3所述的基因表达载体，其特征在于，所述骨架质粒为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA。
5.根据权利要求2所述的基因表达载体，其特征在于，所述基因表达载体为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
6.一种构建权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体的方法，其特性在于，包括以下步骤：
S1：合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列tWPRE；
S2：将骨架质粒双酶切后回收纯化；
S3：将S2中回收纯化的产物与S1中的核苷酸序列tWPRE连接；
S4：将连接后的质粒进行转化涂板；
S5：挑取单菌落并进行测序鉴定。
7.根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或者权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在细胞转染中的应用。
8.根据权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体进行细胞转染的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)接种细胞；
(2)待细胞汇合度至50％-80％时，将权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体转染细胞。
9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体。
10.根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE、权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体或者权利要求7所述的试剂盒在扩大AVV病毒载体容量中的应用。
11.一种AVV病毒，其特征在于，包括权利1所述的核苷酸序列tWPRE或者权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体。
12.如下a)或b)的应用：
a)根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在制备权利要求9所述的试剂盒中的应用；
b)根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在制备权利要求11所述的AVV病毒中的应用。
13.根据权利要求9所述的AVV病毒在细胞感染中的应用。
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