[发明专利]一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法

权利要求书

1.一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、衍生物溶液预备

将脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物放入烧杯中，采用水浴进行温控，温度控制在4～8℃范围内，搅拌调节pH值，使用0.2mol/L的氯化钠溶液和0.1mol/L的盐酸溶液调节液体的pH值至6.00±0.30范围内，获得衍生物溶液；

步骤二、混合配比

温度控制在4～8℃的条件下，向烧杯内所述衍生物溶液中加入白喉CRM197蛋白，搅拌混合，至烧杯中衍生物溶液的脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物与白喉CRM197蛋白的体积比达到1:0.90～1:2.10，脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物的反应浓度在0.5～2.5mg/mL之间，获得平衡溶液；

步骤三、结合反应

温度控制在4～8℃的条件下，向烧杯内所述平衡溶液中加入EDAC，搅拌混合，至烧杯内容物中EDAC的浓度达到20～80mmol/L，开始结合反应，控制反应温度保持在4～8℃，反应用时2～4小时，获得初反应物；

步骤四、时效处理

将烧杯连同所述初反应物置于2～8℃的冰箱中，静置18小时进行时效处理，获得时效反应物；

步骤五、超滤

将所述时效反应物，用超滤机和100kD的超滤膜包进行6次换液超滤，每次以所述时效反应物的5倍体积的蒸馏水进行稀释，除去结合反应过程中多余的残留试剂之后，获得结合物浓缩液；

步骤六、除菌

用0.22μm滤膜对所述结合物纯化液进行除菌过滤，获得脑膜炎球菌荚膜多糖结合物原液。

2.根据权利要求1所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述脑膜炎球菌荚膜多糖衍生物为A群荚膜多糖衍生物、C群荚膜多糖衍生物、W135群荚膜多糖衍生物、Y群荚膜多糖衍生物中的一种。

3.根据权利要求2所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，步骤二中，A群荚膜多糖衍生物与白喉CRM197蛋白的比例为1:0.90～1:1.60。

4.根据权利要求2所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，步骤二中，C群荚膜多糖衍生物与白喉CRM197蛋白的比例为1:0.90～1:1.40。

5.根据权利要求2所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，步骤二中，W135群荚膜多糖衍生物与白喉CRM197蛋白的比例为1:0.95～1:1.30。

6.根据权利要求2所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤二中，Y群荚膜多糖衍生物与白喉CRM197蛋白的比例为1:0.95～1:1.30。

7.根据权利要求1至6中任意一项所述的一种脑膜炎球菌荚膜多糖结合物的制备方法，其特征在于，适用于制备一价流脑结合疫苗及多价流脑结合疫苗过程中的应用。