[发明专利]一种鼠伤寒沙门菌MLVA分型的检测引物组、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种鼠伤寒沙门菌MLVA分型的检测引物组，其特征在于，由下列引物组成：

针对MLVA1位点：

MLVA1-F：5’-CCGGTACTGTCAGGGAAAGA-3’，MLVA1-R：5’-AGCATACCAAACGACCGCTA-3’；

针对MLVA2位点：

MLVA2-F：5’-GCTGGATGTTCTGGCGGAC-3’，MLVA2-R：5’-GAATATCGGCAGCATGGG-3’；

针对MLVA3位点：

MLVA3-F：5’-CGTTTATTCGGGCATGCG-3’，MLVA3-R：5’-TCTGGTGGGGAGAATGACTG-3’；

针对MLVA4位点：

MLVA4-F：5’-AAGAATGCCCCGGAATATGC-3’，MLVA4-R：5’-AGCATGACAGTCCCGGTTC-3’。

2.一种鼠伤寒沙门菌MLVA分型试剂盒，其特征在于，包括多重PCR扩增试剂和检测引物组，所述的检测引物组由下列引物组成：

针对MLVA1位点：

MLVA1-F：5’-CCGGTACTGTCAGGGAAAGA-3’，MLVA1-R：5’-AGCATACCAAACGACCGCTA-3’；

针对MLVA2位点：

MLVA2-F：5’-GCTGGATGTTCTGGCGGAC-3’，MLVA2-R：5’-GAATATCGGCAGCATGGG-3’；

针对MLVA3位点：

MLVA3-F：5’-CGTTTATTCGGGCATGCG-3’，MLVA3-R：5’-TCTGGTGGGGAGAATGACTG-3’；

针对MLVA4位点：

MLVA4-F：5’-AAGAATGCCCCGGAATATGC-3’，MLVA4-R：5’-AGCATGACAGTCCCGGTTC-3’。

3.一种非疾病的诊断和治疗目的的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测鼠伤寒沙门菌的基因组DNA作为模板，以权利要求1所述的MLVA1-F/MLVA1-R、MLVA2-F/MLVA2-R、MLVA3-F/MLVA3-R和MLVA4-F/MLVA4-R作为扩增引物进行多重PCR扩增，对多重PCR扩增产物进行测序，根据测序结果对待测鼠伤寒沙门菌进行MLVA分型。

4.根据权利要求3所述的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方法，其特征在于，所述的多重PCR扩增的反应体系为25μL，包括10×PCR buffer 2.5μL，3.0mmol/L MgCl₂，250μmol/L dNTP，引物MLVA1-F/MLVA1-R、MLVA2-F/MLVA2-R、MLVA3-F/MLVA3-R和MLVA4-F/MLVA4-R各120nmol/L，1.5U Taq酶，模板2μL，余量为ddH₂O。

5.根据权利要求3所述的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方法，其特征在于，所述的多重PCR扩增的反应条件为95℃预变性5min；95℃变性45s、58℃退火45s、72℃延伸45s，共进行30个循环；72℃延伸10min。

6.根据权利要求3所述的鼠伤寒沙门菌MLVA分型方法，其特征在于，所述的根据测序结果对待测鼠伤寒沙门菌进行MLVA分型具体为根据测序结果采用本地Blast分析法对待测鼠伤寒沙门菌MLVA1、MLVA2、MLVA3、MLVA4位点重复数结果判定，根据4个位点的重复数对待测鼠伤寒沙门菌进行MLVA分型。