[发明专利]一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒及使用方法

说明书

本发明适用于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测半乳糖凝集素‑3的试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗Galectin‑3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin‑3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。本发明实施例提供的试剂盒灵敏度较高、均一性良好，稳定性高、特异性好，可实现对临床血清样本中Galectin‑3的快速定量检测，以满足判断心力衰竭严重程度，分期或预测疾病后果，或监视用药效果等临床或科研需要。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒。

背景技术

心力衰竭是由于心脏结构或功能异常导致心室充盈和(或)射血能力障碍为特征的一种临床综合征。临床主要表现为呼吸困难、乏力以及水钠潴留(肺淤血、外周水肿)。调查显示，心力衰竭已成为我国心血管疾病首要死亡原因(59％)，因此探索诊断心力衰竭的新的生化标志物检测指标具有重要意义。在心室重构中，心脏和心脏以外组织器官分泌的一些物质与心力衰竭的进展和不良预后密切相关，有的甚至起着决定性作用。因此寻找精确、有效的标志物来诊断心力衰竭，对心力衰竭患者的预后具有重要临床价值。半乳糖凝集素-3(Galectin-3)是近年来发现的新兴标志物，他们可以对传统标志物，比如B型利钠肽(BNP)等诊断心力衰竭具有一定的补充作用，可为临床对心力衰竭的危险评估和精确评估提供一些线索。

Galectins，即β-半乳糖血凝素超家族，是一类钙非依赖性的糖结合蛋白，具有高度保守性。目前，已发现该家族有14个成员，根据发现的先后顺序依次编号为1-14。Galectins家族的每个成员都具有以下特性：(1)具有特征性的氨基酸序列：每个Galectin家族成员至少包含一个由约130个氨基酸组成的糖识别结构域(CRD)；(2)具有对β-半乳糖苷的亲和性。根据Galectins的分子结构特点，可以将其分为3组：(1)原型，即含有一个CRD的单体，以单体(Galectin-5，-7，-10)或二聚体(Galectin-1，-2，-11，-13，-14)的形式存在；(2)嵌合体型，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成(Galectin-3)；(3)串联重复型，由两个CRD串联融合而成(Galectin-4，-6，-8，-9，-12)。

Galectin-3，是Galectins家族唯一的嵌合体成员，由一个糖基与一个非糖基配体交联结合而成，分子量为32KD，在人类基因组中由单个基因编码，位于14号染色体q21-22位点，总长约17KD。Galectin-3包括3个结构域，NH2末端结合域，即1个糖结构识别域和1个特有的富含甘氨酸、脯氨酸和酪氨酸重复序列的结构域；NH2末端结合域包括控制细胞靶向的12个氨基酸残基，为与具有糖轭合物的细胞表面结合时发挥多种功能所必需；羧基末端的糖结合域可被胰蛋白酶裂解为包含140个氨基酸残基的糖结构识别域。

作为一种多功能的蛋白，Galectin-3广泛分布于心脏、肾脏、肝脏、肺脏以及肠道等组织器官以及成骨细胞、上皮细胞和肠组织等各种组织和细胞中，并在激活的巨噬细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞等血液细胞中高表达。根据细胞类型，Galectin-3可存在于细胞浆、细胞核、细胞膜或细胞外基质，其在细胞内的分布依赖于细胞的增值状态。在静止期细胞，Galectin-3主要分布在胞浆；在增殖期细胞，Galectin-3主要分布在细胞核。Galectin-3可通过非经典分泌途径分泌到细胞外，与细胞表面受体和糖蛋白相互作用，参与跨膜信号转导。

Galectin-3可参与细胞生长、细胞黏附、细胞凋亡、炎性反应、免疫调节、新血管形成、肿瘤分化转移等各种生理和病理过程。研究表明，Galectin-3作为一种重要的促有丝分裂原能在旁分泌方式下通过凝集素-碳水化合物相互作用来刺激肌成纤维细胞的增值和胶原合成。Galectin-3表达与上皮细胞以及包括巨噬细胞，嗜中性细胞和肥大细胞等在内的免疫细胞相关。Galectin-3参与心力衰竭(HF)相关的多种重要的生物学过程，如肌成纤维细胞增生、纤维化、组织修复、心脏重塑和炎症反应等。