[发明专利]一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒及使用方法

权利要求书

1.一种化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，包括：

包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、发光液A、发光液B、标准品稀释液以及检测抗体稀释液。

2.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述包被有抗Galectin-3单克隆抗体的发光板按照如下方法制备：

将抗Galectin-3单克隆抗体溶于缓冲液中，至抗Galectin-3单克隆抗体浓度为2μg/mL，得到混合液；

将所述混合液加入微孔板的孔中，每孔100μL；加盖板膜，2-8℃放置18-24小时，用0.5％Tween20-PBS洗涤1次；向每孔中加入封闭液，每孔110μL；在2-8℃放置18-24小时，扣干；置25-35℃干燥间内，湿度30％，干燥时间20-24小时，铝箔袋封装板子，2～8℃保存，即得；

所述缓冲液为100mmol/L、PH＝9.6CB的碳酸盐缓冲液；

所述封闭液的溶剂是20mmol/L、pH＝7.4的酸盐缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的浓度如下：质量分数为3％的BSA、质量分数为0.5％的酪蛋白、质量分数为8％的蔗糖、150mmol/L的NaCl以及质量分数为0.1％的防腐剂Proclin-300。

3.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗Galectin-3单克隆抗体溶液按照如下方法制备：

抗Galectin-3单克隆抗体纯化、定量后，在0.01mol/L、pH＝9.0-9.5的碳酸盐缓冲溶液中透析，得到终浓度为5mg/mL的抗Galectin-3单克隆抗体溶液；

取辣根过氧化物酶溶解于水，制得终浓度为5mg/mL的辣根过氧化物酶水溶液；

向所述辣根过氧化物酶水溶液中加入NaIO₄，NaIO₄的浓度为37.5mg/mL，室温避光搅拌20min，得到氧化后的酶液；

所述氧化后的酶液在1mmol/L、pH＝4.4的醋酸盐缓冲液中、4℃透析过夜，换液3次；

取出透析袋中溶液，加入0.2mol/L的Na₂CO₃缓冲溶液，调至pH＝9.0-9.5，并迅速与所述抗H-FABP单克隆抗体溶液按照体积比1:1混合，室温避光轻微搅拌2h；

加入新配的6mg/mL NaBH₄溶液100ul，混匀，4℃反应2h，于0.15mol/L、pH＝7.4碳酸盐缓冲溶液中、4℃透析过夜，换液3次；

加入牛血清白蛋白使牛血清白蛋白终浓度为2-3mg/mL，在转速为10000rpm下混合3min，收集上清，分装冻存，即得。

4.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述标准品为Galectin-3抗原。

5.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的组成：所述样本稀释液的溶剂是20mmol/L、pH＝6.0的碳酸盐缓冲溶液，溶质及其在所述样本稀释液中的浓度如下：质量分数0.2％的明胶、质量分数0.2％的酪蛋白、150mmol/L的NaCl、质量分数0.01％的Tween-20、质量分数5％的蔗糖、质量分数为0.5/万的溴钾酚紫以及质量分数0.1％的防腐剂Proclin-300。

6.如权利要求1所述的化学发光法检测半乳糖凝集素-3的试剂盒，其特征在于，浓缩洗涤液的组成：浓缩洗涤液的组成的溶剂是水，溶质及其在所述浓缩洗涤液中的浓度如下：116g/L的Na₂HPO₄·12H₂O、11.84g/L的NaH₂PO₄·2H₂O、180g/L的NaCl、5mL/L的吐温20以及1mL/L的防腐剂Proclin-300。