[发明专利]一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的方法和器具

权利要求书

1.一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

S1、胚胎预处理：将获取的胚胎置于平衡液中处理至少2min，取出并移置于保存液处理至少1min，其中，按质量摩尔浓度计，平衡液由0.3mol/kg磷酸缓冲盐溶液、11.0mol/kg乙二醇、0.7mol/kg蔗糖和0.0062mol/kg聚蔗糖混合而成；按质量摩尔浓度计，保存液以HTF培养基为基础液由24.6mol/kg乙二醇、3.1mol/kg蔗糖和0.0062mol/kg聚蔗糖混合而成；

S2、胚胎入管：按一定长度首先向无菌麦管中置入蔗糖培养液，然后间隔地且顺序地置入间隔空气柱和混合有胚胎的保存液，最后将无菌麦管的两个端口作密封处理；

S3、胚胎预冷冻：首先将经过密封处理的无菌麦管封装于麦管传热容器内，随后再将麦管传热容器置于真空保温容器中，最后将乙醇溶液填充于真空保温容器内并使麦管传热容器位于乙醇溶液的液面内；

S4、胚胎保存：将真空保温容器迅速放置于-80摄氏度的冰箱内，即可完成冷冻胚胎的保存。

2.如权利要求1所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的方法，其特征在于：在完成步骤2后并执行步骤3之前的期间内，将无菌麦管置于液氮中作临时保存处理。

3.如权利要求1所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的方法，其特征在于：在步骤S2中，对容积为0.25ML的麦管作紫外线照射消毒处理以获得无菌麦管，置入的混合有胚胎的保存液的长度为2cm。

4.如权利要求1-3中任一项所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的方法，其特征在于：预先将麦管传热容器和盛装有乙醇溶液的真空保温容器置于-80摄氏度的冰箱中作冷冻平衡处理，冷冻平衡处理时间不少于24h。

5.一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的器具，其特征在于：它包括真空保温容器、盛装于真空保温容器内的乙醇溶液、置于真空保温容器内并位于乙醇溶液的液面内的麦管传热容器以及封装于麦管传热容器内且内部填充有胚胎的无菌麦管，所述无菌麦管的两个端口作密封处理。

6.如权利要求5所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的器具，其特征在于：所述麦管传热容器为由铝合金材料制成的圆筒状结构体。

7.如权利要求5所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的器具，其特征在于：所述无菌麦管内形成有经填充蔗糖培养液所形成的营养液段、经填充空气所形成的间隔空气段以及经填充保存液所形成以用于混合胚胎的保存液段，所述保存液段位于相邻的两个间隔空气段之间，且所述营养液段与间隔空气段相邻并位于无菌麦管的至少一端。

8.如权利要求7所述的一种在-80度冰箱中保存玻璃化冷冻胚胎的器具，其特征在于：所述保存液以HTF培养基为基础液由24.6mol/kg乙二醇、3.1mol/kg蔗糖和0.0062mol/kg聚蔗糖混合而成。