[发明专利]基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器及其应用

权利要求书

1.一种基于DNA-铜纳米簇构建的DNA相关酶电化学生物传感器，其特征在于，所述电化学生物传感器是根据如下方法构建获得的：

(1)将巯基DNA和三(2-羧乙基)膦TCEP混合均匀，在37℃下放置30～90min，滴于干净的裸金电极Au表面，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 1；

其中，巯基DNA用量为2.5～7.5μL，浓度为0.25～0.75μM；

三(2-羧乙基)膦TCEP用量为0.5～1.5μL，浓度为0.5～1.5mM；

(2)取1～3μL 3-吗啉丙磺酸MOPS缓冲液、0.5～1.5μL 5×TdT缓冲液、dTTP和TdT制备TdT反应液，控制总体积为2.5～7.5μL，混合均匀，滴于Electrode 1表面，在37℃下放置0.5～1.5h，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 2；

其中，3-吗啉丙磺酸MOPS缓冲液构成为：10mM MOPS，150mM NaCl，pH 7.6；

dTTP用量为0.5～1.5μL，浓度为5～15mM；

TdT用量为0.1～1.5μL，浓度为5～15U/mL；

(3)向Electrode2中电极表面滴加Cu²⁺，室温孵育10～30min，蒸馏水缓缓冲洗电极，然后向电极表面滴加抗坏血酸钠溶液，室温反应10～30min，蒸馏水缓缓冲洗电极，记为Electrode 3，于磷酸缓冲溶液中检测电化学响应，即得所述电化学生物传感器；

其中，Cu²⁺用量为2.5～7.5μL，浓度为0.5～1.5mM；

抗坏血酸钠溶液用量为2.5～7.5μL，浓度为1～3mM；

磷酸缓冲溶液PBS构成为：浓度0.1M，pH 7.0；

其中，在步骤(2)中，改变TdT浓度，如步骤(1)-(3)制备一系列传感器，用来检测不同浓度TdT的电化学响应；

或者，在步骤(1)后，取Exo I溶液滴涂于电极表面，在室温下孵育30～120min，蒸馏水缓缓冲洗电极，再把步骤(2)中制备的TdT反应液滴加到电极表面，如步骤(1)-(3)制备一系列传感器，用来检测不同浓度Exo I的电化学响应；其中，Exo I溶液用量为2.5～7.5μL，浓度为0.01～50U/mL。

2.根据权利要求1所述的电化学生物传感器，其特征在于，TdT的检测限低至0.0008U/mL。

3.根据权利要求1所述的电化学生物传感器，其特征在于，Exo I的检测限低至0.002U/mL。