[发明专利]一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法

权利要求书

1.一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)使用高温高压法对丝素蛋白溶液和改性透明质酸溶液进行灭菌处理，步骤1所述高温高压的条件为120℃、0 .25MPa ,灭菌时间为20min；

2)将丝素蛋白溶液、改性透明质酸溶液混合形成预聚物溶液，并添加光引发剂；

3)超声处理步骤2)所得的预聚物溶液，超声后溶液具有流动性且呈半透明状；

4)将经步骤3)所得溶液与细胞混合均匀得到细胞预聚溶液；

5)将细胞预聚溶液加入细胞培养板中，在紫外光下进行光交联成胶，然后放置在37℃恒温箱中，至预聚溶液变成乳白色后即制得；

步骤1)所述丝素蛋白依次采用了脱胶、溶解、透析、浓缩的分离提 纯工艺，具体流程为：

1）脱胶：采用碱煮法对家蚕蚕丝进行脱胶处理：

取1g无水碳酸钠加入2L的蒸馏水中溶解，加热至溶液沸腾后放入20g蚕丝，在溶液持续沸腾下用玻璃棒不断搅拌，0.5h后取出蚕丝，用去离子水清洗10次以上；更换2L去离子水，提升Na2CO3溶液浓度至1w/v%，将洗好的蚕丝放入其中继续沸腾搅拌煮0.5h，取出蚕丝再次用去离子水反复清洗，最后风干备用；

2）溶解：

采用高浓度溴化锂溶液对脱胶蚕丝进行溶解，且脱胶蚕丝的质量与溶液的体积比为4:25：

称取4g脱胶蚕丝和21g溴化锂粉末，将21g溴化锂溶于25mL去离子水中，待溴化锂完全溶解并释放大量热的同时，将4g脱胶蚕丝加入到该溶液中，待蚕丝整体溶解后，将其放在60℃烘箱内20min，维持一定温度以确保蚕丝完全溶解；

3）透析：利用截留分子量为3500D的透析袋，并在4℃的条件下透析：

将溶解后的丝素蛋白倒入截留分子量为3500D的透析袋中，并将其放入去离子水中，每天更换5次去离子水，透析3天即可；

4）浓缩：利用高浓度的聚乙二醇溶液进行浓缩：

将透析结束的丝素蛋白溶液进行离心处理，离心时间5min、转速4000rmp,除去不溶杂质后再次将溶液倒入3500D的透析袋中，并放入高浓度的PEG溶液内以除去部分水分；

所述改性透明质酸溶液为甲基丙烯酸酐改性透明质酸溶液。

2.根据权利要求1所述一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤1)所述丝素蛋白的质量体积分数为8％，所述改性透明质酸溶液的质量体积分数为2％，所述丝素蛋白溶液与改性透明质酸溶液的添加质量比例为8.6 ～9 .5：1 .4～0 .5，所述光引发剂与预聚物溶液的质量体积比(g/ml)为0 .5％。

3.根据权利要求1所述一种可实现三维细胞装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，其特征在于：步骤4)所述细胞预聚溶液中细胞密度为100万个/mL。

4.根据权利要求1所述一种可实现细胞三维装载的丝素蛋白/透明质酸双网络水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤5)所述紫外光光源波长：320-480nm，紫外点光源功率： 7.0mW/cm²。