[发明专利]一种分离与测定磷酸奥司他韦及其特定杂质的高效液相色谱方法

说明书

本发明涉及一种分离与测定磷酸奥司他韦及其特定杂质的高效液相色谱方法，该方法采用辛烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液‑甲醇‑乙腈体积比为(620:245:135)，柱温48℃~50℃，检测波长为207nm，流速为每分钟1.1~1.3ml。该方法能同时完全分离磷酸奥司他韦3个非对映异构体，2个同分异构体(杂质C、杂质D)、特定工艺杂质A、B、E，以及《中国药典》2015版中收载的磷酸奥司他韦特定杂质I、II、III，且方法简单准确、灵敏度高，对药物产品的质量控制具有非常重要的意义。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种分离与测定磷酸奥司他韦及其特定杂质的高效液相色谱方法。

背景技术

磷酸奥司他韦(seltamivir phosphate)，化学名为：(R，4R，5S)4-乙酰胺-5-胺基-3(-丙氧乙酯)1-环己烷-1羧酸乙酯磷酸盐，其化学结构式为：

磷酸奥司他韦，商品名达菲(AMIFLU)，由美国的Gilead Sciences Inc.(利德科学公司)1996年研制成功的用于预防或治疗禽流感的抗病毒化合物。该药物具有对流感病毒的靶点治疗特异高效、安全、耐药性小等特点，已在多国获批上市，是目前最有效的抗流感病毒药物，也是最常用的处方药物之一。

磷酸奥司他韦制备工艺较长，而且有多个手性中心，合成过程中，可能产生杂质I、II、III、A、B、C 、D、E、RRR异构体、RSS异构体和RSR异构体杂质。其中杂质I、II、III为降解杂质，杂质C、D为磷酸奥司他韦的同分异构体，杂质A、B是与磷酸奥司他韦结构类似的工艺杂质，杂质E为特定工艺杂质三苯基氧膦。

在合成过程中产生的杂质如果不进行控制，会影响最终药物的纯度和质量。因此，实现磷酸奥司他韦及其特定杂质的分离和测定对磷酸奥司他韦的质量控制显得非常重要。目前，美国药典USP41发布的磷酸奥司他韦质量标准中含有II、III及其它两个工艺杂质，中国药典2015版发布的磷酸奥司他韦质量标准中仅含有I、II、III三个杂质，均不能对上述杂质同时进行分离控制。现有文献“测定磷酸奥司他韦原料药的含量并检测其有关物质”及“高效液相色谱法测定磷酸奥司他韦的含量和有关物质”也并未对这些杂质进行研究。因此，目前尚无一种能同时完全分离磷酸奥司他韦杂质I、II、III、A、B、C 、D、E、RRR异构体、RSS异构体、RSR异构体的文献报道。磷酸奥司他韦作为一种常见的治疗流感药物，在日常生活中使用较频繁，为了保证药物研发和生产的质量，有必要研究开发一种准确有效测定磷酸奥司他韦中杂质的分析测定方法，对药物产品的质量控制具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单准确，能同时有效分离测定磷酸奥司他韦及其特定杂质的方法。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种分离与测定磷酸奥司他韦及其特定杂质的高效液相色谱方法，该方法包括如下步骤：

（1）高效液相色谱条件：

色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶液相色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)

检测波长：207nm；

流速：1.1~1.3ml/min；

柱温：48~52℃；

进样量：15μl

流动相：0.04mol/L~0.06mol/L 磷酸二氢钾缓冲液-甲醇-乙腈(620:235:145)~(620:255:125)；所述0.04mol/L~0.06mol/L磷酸二氢钾缓冲液用1mol/L氢氧化钾调pH至6.20~6.40；

稀释剂：磷酸溶液(取磷酸0.38g，用水稀释至1000ml):甲醇:乙腈=620:245:135(v/v/v)。