[发明专利]一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法

说明书

本发明公开了一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，本发明的检测多种抗生素的方法所用的检测时间大大缩短，可同步检索出十种抗生素，其中包括磺胺类抗生素、β‑内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素。简化了检测工艺、降低了检测成本同时提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及抗生素检测技术领域，特别是涉及一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法。

背景技术

抗生素不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体、螺旋体、立克次氏体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，抗生素可以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用人工合成或部分人工合成的。但是随着科技的进步，抗生素的生产工艺日渐成熟，大量的抗生素被投入到人们的生活中被广泛的使用，据不完全统计，约有75％的抗生素是不能被人或动物所利用，而是通过尿液或粪便等以原药或代谢产物的形式排放到环境中，进而导致环境中耐药水平的提高，成为重要的新型环境污染物，严重危害生态环境安全和人类健康。

而邯郸市滏阳河和沁河水的成分复杂，抗生素多以痕量存在，因此，如何准确检测出滏阳河和沁河水样中存在的多种抗生素，以便以对其进行环境预警和有效根治是本地区的一项难题。

在专利CN107561187A中公开了一种同步检测污染水体重多种抗生素的方法，该方法采用的是高效液相色谱串联质谱法对抗生素的含量进行检测，能够同步检测20几种抗生素，该发明的采用的仪器成本高昂，同时检测时间较长，针对不断变化的待处理水体，需要提高检测效率，降低检测时间，同时提高检测的准确度。

发明内容

本发明的目的是提供了一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法。采用本发明的技术方案，利用高效液相色谱仪在14min内准确分析出多种抗生素，所述多种抗生素包括磺胺类抗生素、β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素。

本发明的一种高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，所述抗生素包括磺胺类抗生素、β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素，该方法包括以下步骤：

(1)首先选取含多种抗生素的待测水样；

(2)将待测水样进行过滤，然后加入Na₂-EDTA，并调节pH值至3；

(3)在活化后的HLB小柱中通入步骤(2)处理后的待测水样，对待测水样进行富集；

(4)利用洗脱剂对富集后的HLB小柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到浓缩液；

(5)将浓缩液用甲醇定容至1mL，移取稀释后的待测水样，利用高效液相色谱进行检测抗生素，所述高效液相色谱采用Shim-pack GIST C18的色谱柱，柱温为40℃，进样体积为30μL，其中高效液相色谱仪采用的流动相为以浓度为0.1％的甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C，采用梯度洗脱方式，流动相的流速为0.8mL/min；

(6)计算出水样中抗生素对应的峰面积，根据标准曲线定量计算，得出水样中多种抗生素的含量，其中所述标准曲线是精密称取甲氧苄啶、磺胺嘧啶，磺胺甲恶唑，头孢克洛，头孢克肟，头孢唑林，氟罗沙星，诺氟沙星，环丙沙星，洛美沙星，每种标准品5mg，分别用甲醇定容至10mL，配成将标准品配制成0.5mg/mL的单标储备液。取1mL单标储备液，用甲醇定容至25ml，配置成20mg/L的混标储备液备用，4℃保存，用甲醇将混标储备液稀释成如下梯度浓度的标准系列：1μg/mL，0.6μg/mL，0.5μg/mL，0.4μg/mL，0.3μg/mL，0.2μg/mL，0.1μg/mL，然后按照步骤(5)的色谱程序进行检测得出的。

优选的，所述步骤(2)中采用孔径为0.45μm滤膜过滤水样，且Na₂-EDTA的加入量为0.5g/L。

优选的，所述步骤(2)中采用4mol/L的盐酸调节水样的pH。