[发明专利]一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法

权利要求书

1.一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述抗生素包括磺胺类抗生素、β-内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素，该方法包括以下步骤：

(1)首先选取待测水样；

(2)将待测水样进行过滤，然后加入Na₂-EDTA，并调节pH值至3；

(3)在活化后的HLB小柱中通入步骤(2)处理后的待测水样，对待测水样进行富集；

(4)利用洗脱剂对富集后的HLB小柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到浓缩液；

(5)将浓缩液用甲醇定容至1mL，移取稀释后的待测水样，利用高效液相色谱进行检测抗生素，所述高效液相色谱采用Shim-pack GIST C18的色谱柱，柱温为40℃，进样体积为30μL，其中高效液相色谱仪采用的流动相为以浓度为0.1％的甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C，采用梯度洗脱方式，流动相的流速为0.8mL/min；

(6)计算出水样中抗生素对应的峰面积，根据标准曲线定量计算，得出水样中多种抗生素的含量；

所述磺胺类抗生素为甲氧苄啶、磺胺嘧啶，磺胺甲恶唑，β-内酰胺类抗生素为头孢克洛，头孢克肟，头孢唑林，喹诺酮类抗生素为氟罗沙星，诺氟沙星，环丙沙星，洛美沙星；

所述步骤(5)流动相的梯度洗脱方式为：0-6min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为8:1:1；6-8min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为13:5:2；8-9min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为6:3:1；9-13min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为5:4:1；13-14min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为8:1:1。

2.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用孔径为0.45μm滤膜过滤水样，且Na₂-EDTA的加入量为0.5g/L。

3.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用4mol/L的盐酸调节水样的pH。

4.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述步骤(3)HLB小柱的活化方法为依次用5mL甲醇，5mL质量浓度为0.1％甲酸水溶液通过HLB小柱进行活化处理。

5.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述步骤(3)待测水样通过HLB小柱的速度为5mL/min。

6.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，步骤(4)对富集后的HLB小柱进行洗脱具体为：首选使用6mL质量浓度为5％的甲醇水溶液对富集后的HLB小柱进行淋洗，真空干燥20min后再使用6mL甲醇进行淋洗。

7.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，步骤(4)中洗脱液的浓缩方法为自然吹风至近干。

8.根据权利要求1所述的利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的检测波长为270nm。