[发明专利]一种辅酶I和其他大分子物质的分离方法

说明书

本发明涉及一种辅酶I和其他大分子物质的分离方法，包括如下步骤：酵母细胞破壁液的制取，辅酶I粗品溶液的制取，冲洗，中空纤维素柱的过滤及切向流过滤膜包的过滤，采用中空纤维素柱和切向流过滤膜包的超滤膜过滤，降低酵母细胞破壁液中其他大分子物质的含量，提升辅酶I的纯度。

技术领域

本发明属于超滤分离纯化技术领域，具体涉及一种辅酶I和其他大分子物质的分离方法。

背景技术

膜分离技术是一项新型的高效分离技术，已被国际公认为是20世纪末到21世纪中期最有发展前途的一项重大高新生产技术，是利用天然或者人工合成的具有选择透过性的薄膜，以外界能量或者化学位差为推动力，对双组分或多组分体系进行分离、分级、提纯或富集的技术。膜分离技术包括超滤、微滤、纳滤和反渗透等，膜技术日趋成熟，已开始应用于医药领域，如临床用于血透、血液净化、亲和过滤、肾透等，在生物制药领域，用于抗生素和氨基酸的生产，发酵液和培养液的澄清，生物制品的灭菌与去除热源等，以及用于中药制剂的生产，尤其是超滤技术自20世纪90年代以来以其高效、节能和绿色等特点，在重要制剂中的应用越来越多，膜技术与常规的离心分离、沉降、过滤、萃取等方法相比，具有明显的潜在优势，操作方便，结构紧凑，能耗低，过程简单，无二次污染，采用膜分离技术处理后，可有效克服无效成分量大而有效成分量低等共性缺点，将中药制成品质精良、疗效显著的现代制剂，酵母破壁液中辅酶I和其他大分子物质较难分离，导致辅酶I中大分子物质比较多，纯度不够高，现有的辅酶I分离技术是采用超滤卷式膜分离方法，对杂质的去除率不高，专属性不强，重现性不好且不够准确。

发明内容

本发明的目的是为了解决背景技术中所提出的问题，而提供一种辅酶I和其他大分子物质的分离方法，采用中空纤维膜柱和切向流过滤膜包的超滤膜过滤，降低酵母细胞破壁液中其他大分子物质的含量，提升辅酶I的纯度。

本发明的目的是这样实现的：

一种辅酶I和其他大分子物质的分离方法，包括如下步骤：

S1、酵母细胞破壁液的制取：将鲜酵母经过破壁处理后得到酵母细胞破壁液。

S2、辅酶I粗品溶液的制取：将S1制得的酵母细胞破壁液经过滤、沉淀、离心后得到辅酶I粗品溶液。

S3、将中空纤维膜柱和切向流过滤膜包分别连通至超滤系统，用0.1mol/L的氢氧化钠溶液分别清洗中空纤维膜柱和切向流过滤膜包，用纯化水将中空纤维膜柱和切向流过滤膜包冲洗至中性。

S4、中空纤维膜柱的过滤：将S2制得的辅酶I粗品溶液置于中空纤维膜柱内进行初过滤。

S5、切向流过滤膜包的过滤：将S4过滤后的溶液置于切向流过滤膜包内进行再次过滤，过滤完成后即可将酵母细胞破壁液中的除辅酶I外的其他大分子物质分离。

进一步的，S1中，将鲜酵母加入2倍的0.5mol/L盐酸溶液中，边搅拌边加入，加料完毕，加热至55-60℃，保温10min，降温至15-20℃，得酵母破壁液。

进一步的，S2中，过滤时将酵母液的pH调整至等电点3.0，蛋白质分子呈等电状态，菌体与核苷酸分离沉淀，除去蛋白质分子的水膜，则蛋白质分子互相凝聚、沉淀析出，经10000r/min高速离心机分离后，制成辅酶I粗品溶液。

进一步的，S4中，中空纤维膜柱为以聚砜、二甲基乙酰胺为原料加工成中空内腔的纤维丝，中空纤维膜柱的截留分子量为30kd。

进一步的，S5中，膜包的截留分子量为3kd。

进一步的，S4中，在过滤前，先用200±20ml/min的低流速排空中空纤维膜柱中的气体，再调至600±20ml/min的合适流速，整个过程中中空纤维膜柱中的压力不超过0.2Mpa。