[发明专利]基于细胞外衍生基质修饰的丝素蛋白多孔支架的制备方法在审
| 申请号： | 201910066736.1 | 申请日： | 2019-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN109793927A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 周瑾;刘伟;王常勇;朱惠敏;王春兰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | A61L27/22 | 分类号： | A61L27/22;A61L27/38;A61L27/56 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 100036*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多孔支架 修饰 丝素蛋白 衍生基质 支架材料 制备 心肌成纤维细胞 支架材料表面 生物相容性 细胞外基质 细胞 生物材料 体外构建 心肌组织 工程化 素蛋白 对丝 组份 | ||
1.一种基于细胞外衍生基质修饰的丝素蛋白多孔支架的制备方法，其特征在于，将心肌成纤维细胞接种到丝素蛋白支架材料上进行培养，得到修饰后的丝素蛋白多孔支架。
2.根据权利要求1所述基于细胞外衍生基质修饰的丝素蛋白多孔支架的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
S1. 丝蛋白预处理：将蚕茧剪碎并放入质量分数为17%的煮沸的碳酸钠水溶液中煮30分钟，取出冷却并挤出水分，然后用水漂洗丝蛋白20分钟，取出后通风干燥；
S2. 制备丝蛋白溶液：将干燥的丝蛋白溶于20%的9.3M溴化锂溶液中，60℃条件下溶解4小时，得到20%的丝素蛋白，透析2天，然后于在4℃9000rpm条件下离心20分钟，取出于4℃保存；
S3. 制备丝蛋白支架： 将丝素蛋白溶液加入模具中，并撒上盐颗粒凝胶化1-2天，将凝胶化的丝蛋白支架于蒸馏水浸泡去盐后进行高压灭菌；
S4. 分离心肌成纤维细胞：取新生1天龄SD大鼠，开胸，取心脏，置于预冷的PBS液体中，剪碎，并利用0.05%胰酶反复消化直至组织块消化完全，1000rpm/7分钟离心，获得细胞沉淀，于高糖DMEM加15%胎牛血清中重悬并接种在培养皿上，1小时后弃去未贴壁的心肌细胞，获得原代心肌成纤维细胞；并利用高糖-DMEM加10%胎牛血清培养基培养心肌成纤维细胞至85-90%融合后消化；
S5. 心肌成纤维细胞修饰丝素蛋白：将消化好的心肌成纤维细胞接种在支架材料上，接种密度为1×107个/ml，每个支架接种30μl，利用高糖-DMEM加10%胎牛血清培养基培养10天，得到细胞外衍生基质修饰的丝素蛋白支架。
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