[发明专利]蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法

说明书

蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法，包括步骤：将蜂王浆溶于pH7的缓冲液A中，震荡过夜；取混合液进行低温离心，取上清用滤膜过滤；将上清上样到用缓冲液A平衡过的预装弱阳离子层析柱；以缓冲液A按照预定流速冲洗柱子，得蜂王浆主蛋白1；通过层析仪的梯度混合器将缓冲液A和缓冲液B按比例混合，并逐渐提高缓冲液B的比例，对柱子进行梯度洗脱，依次将结合在柱子上的蜂王浆主蛋白2和3洗脱下来。本发明的蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法重复性好，产量高，操作简单、方便快捷，可级联放大，充分满足科研和规模化生产的需要，克服了传统分离方法存在的耗时费力、成本高、收率低等缺陷，优化了蜂王浆主蛋白的提取工艺。

技术领域

本发明涉及化学提取、分离，具体涉及蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法。

背景技术

蜂王浆的蛋白组分主要由蜂王浆主蛋白1、2、3组成，蜂王浆主蛋白1、2、3各具有独特的生理功能，均有益于人类健康。传统的蜂王浆主蛋白1、2、3的纯化方法主要有透析、多种层析分离方法叠加组合等，不仅耗时、费力而且成本高、收率低，难以满足生物学研究所需，也不适合规模化生产。因此，开发一种简单快速的蜂王浆主蛋白纯化方法是必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法，以克服传统分离方法存在的耗时费力、成本高、收率低等缺陷。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案具体如下：

蜂王浆主蛋白1、2、3的快速纯化方法，包括步骤：

S1：将蜂王浆溶于pH7的缓冲液A中，震荡过夜；

S2：取步骤S1中的蜂王浆与缓冲液A的混合液进行低温离心，之后取上清用滤膜过滤；

S3：将步骤S2中过滤后的上清上样到用缓冲液A平衡过的预装弱阳离子层析柱；

S4：以5-10倍柱体积的缓冲液A按照1ml/min的流速冲洗柱子，得蜂王浆主蛋白1；

S5：通过层析仪的梯度混合器将缓冲液A和pH7.5的缓冲液B按比例混合，以缓冲液A和缓冲液B的混合液按照1ml/min的流速对柱子进行梯度洗脱，并逐渐提高缓冲液B的比例，依次将结合在柱子上的蜂王浆主蛋白2和3洗脱下来。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述步骤S1中的蜂王浆与缓冲液A的重量体积比为1：5。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述步骤S2具体包括：取步骤S1中的蜂王浆与缓冲液A的混合液，于4℃，20000g条件下离心20分钟后，取上清，上清用0.2微米孔径的滤膜过滤。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述步骤S5具体包括：通过层析仪的梯度混合器将缓冲液A和pH7.5的缓冲液B按比例混合，以缓冲液A和缓冲液B的混合液按照1ml/min的流速对柱子进行梯度洗脱，且混合液中的缓冲液B的比例在20分钟内从0提高到100％，依次将结合在柱子上的蜂王浆主蛋白2和3洗脱下来。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述步骤S5之后还包括步骤S6：将分离纯化的蜂王浆主蛋白1、2、3浓缩后，-80℃分装保存。

作为本发明进一步改进的技术方案，在所述步骤S4和S5的蛋白洗脱过程中，用280纳米的紫外检测器进行检测，出现蛋白峰即进行收集。

作为本发明进一步改进的技术方案，所述缓冲液A的组成为22mM NaH₂PO₄，3mMNa₂HPO₄，2mM二硫苏糖醇，0.05％NaN₃。